Caspase 9活性分光光度法檢測試劑盒

一、產品簡介

Caspase 9活性分光光度法檢測試劑盒(Caspase 9 Activity Colorimetric Assay Kit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase 9酶活性或純化的Caspase 9酶活性的試劑盒。

 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6，有時被寫作caspase-9或caspase9，是細胞凋亡信號轉導過程中比較上游的一個caspase。線粒體釋放細胞色素c以后，caspase 9可以和細胞色素c以及Apaf1形成復合物，同時被激活。激活的caspase 9可以激活細胞凋亡的zui關鍵酶caspase 3，從而促進后續(xù)的細胞凋亡信號。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進行調控。Caspase 9也稱FLICE、MACH或Mch5，有時被寫作Caspase-9 或caspase8，通常以酶原的形式存在，在細胞凋亡的信號轉導過程中被激活。Caspase 9被認為是細胞凋亡信號轉導過程中比較上游的一個caspase。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，它被激活。

Caspase-9 活性分光光度法檢測試劑盒就是將Caspase-9 序列特異性的多肽Ac-LEHD-pNA (acetyl-Leu-Glu-His-Asp p-nitroanilide)偶聯(lián)至發(fā)色基團：pNA (p-nitroaniline)；當該底物被Caspase-9 剪切后，黃色基團pNA即游離出來，可通過酶標儀或分光光度計（λ=405nm 或400nm）測定其吸光值，考察Caspase-9 的活化程度。pNA在405nm附近有強吸收。

本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織Caspase-9 活性的檢測。

Caspase 9活性分光光度法檢測試劑盒
二、試劑盒以外自備儀器和試劑
低溫高速離心機、酶標儀或分光光度計（100μL的比色皿）、微量移液器、玻璃勻漿器（組織樣本）

1.5m L離心管、PBS、蛋白定量試劑及儀器

三、保存條件：

-20℃保存，Ac-LEHD-pNA需避光保存。

四、注意事項：

1、須自備可以測定A405或A400的酶標儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應分光光度計。優(yōu)先考慮測定A405，如有困難可以測定A400。 

2、Ac-LEHD-pNA需盡量避免反復凍融，請注意適當分裝和避光保存。

3、測定蛋白濃度需Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

4、有文獻報道少數類型的細胞凋亡檢測不到Caspase 9的激活。可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機制，這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-9 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。

5、本試劑盒的裂解液可以和碧波生產的其它Caspase活性檢測試劑盒的裂解液通用，即本試劑盒裂解液制備的蛋白樣品可以用于碧波其它Caspase活性檢測試劑盒的檢測。

6、細胞數量需達到3～5×106個或新鮮組織100mg，以便能達到測定需要的100～200μg蛋白的要求，因為Caspase-9 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關，如測定的OD值偏低，可通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。

7、樣品中激活的caspase水平很低。首先確認凋亡現(xiàn)象是否明顯，如果凋亡比較明顯并且確認該caspase是可以被激活的，可以適當調節(jié)誘導細胞凋亡的時間，希望能找到一個caspase激活比較強的時間點，這樣就可以檢測出該caspase的激活?？梢宰饕粫r間曲線，例如誘導凋亡0、2、4、8、16和24小時，或0、1、2、4、8和16小時，或0、1、2、4、6和8小時等。具體的誘導凋亡時間需根據具體情況而定。

8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

Caspase 9活性分光光度法檢測試劑盒

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