2×PCR Mix

產(chǎn)品簡介

2×PCR Mix中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP及PCR反應(yīng)的優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑，只需加入適量引物、模板和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。大大簡化了PCR操作，使操作更加快捷，提高了效率；也減少了PCR操作過程中可能導(dǎo)致的污染，使PCR的重復(fù)性更好。

2×PCR Mix可以進(jìn)行各種常規(guī)的PCR擴(kuò)增，特別適合用于定量和半定量的PCR擴(kuò)增。

試劑盒以外自備儀器和試劑
無菌雙蒸水，模板，PCR管，可調(diào)移液器，PCR儀。

保存條件：

-20℃保存，一年有效。

注意事項(xiàng)：

1、  由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Taq酶時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。

2、  Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯(cuò)幾率約為2.2×10-5，對于大于1kb的DNA斷的克隆*使用出錯(cuò)幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測，Taq DNA polymerase是*選擇。

3、  為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

2×PCR Mix
操作規(guī)程

1、   使用前每個(gè)組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s。

2、 取滅過菌的0.2ml PCR管，參考如下表格設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（50 μL反應(yīng)體系）：

  注：對于不同類型的模板在50μl反應(yīng)體積中*用量如下：

哺乳動(dòng)物基因組DNA：0.1-1μg；大腸桿菌基因組DNA：10-100ng；質(zhì)粒DNA：0.1-10ng。

過多的模板DNA容易導(dǎo)致非特異性的PCR產(chǎn)物

3、   輕輕混勻(可以用Vortex在zui低速度輕輕混勻或用移液器吹打混勻)，隨后2000rpm離心20s沉淀液體。

4、   如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋，則在管內(nèi)滴入一滴礦物油。

5、 各設(shè)置好的PCR反應(yīng)管置于PCR儀上，開始PCR反應(yīng)。

a、    PCR擴(kuò)增條件參考：

  Step1(起始變性)：    94℃ 3min

Step2(變性)：        94℃ 30sec

Step3(退火)：        45～65℃ 30sec

Step4(延伸)：        72℃ 1min

Step5(循環(huán))：        Go To Step2 for 25～35 cycles

Step6(zui終延伸)：    72℃ 10min

StepP6(臨時(shí)保存)：   4℃ forever

b、   PCR反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR產(chǎn)物的長度和GC含量等條件的不同設(shè)定不同的PCR反應(yīng)條件包括溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)及鎂離子的濃度等。

c、 Step4(延伸)的時(shí)間設(shè)置需根據(jù)PCR產(chǎn)物的長度進(jìn)行設(shè)置，通常每kb產(chǎn)物的延伸時(shí)間為1分鐘。例如PCR產(chǎn)物的長度為1kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為1分鐘，PCR產(chǎn)物的長度為2kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為2分鐘，以此類推。

d、 對于初次進(jìn)行的PCR，為盡量確?？梢詳U(kuò)增出預(yù)期的PCR產(chǎn)物，可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為35。對于需進(jìn)行半定量或定量的PCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，使PCR反應(yīng)沒有達(dá)到平臺期。

6、   反應(yīng)結(jié)束后，取反應(yīng)液10μL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)PCR反應(yīng)產(chǎn)物。如果此PCR產(chǎn)物需用于以后實(shí)驗(yàn)，應(yīng)將PCR產(chǎn)物冷凍保存。 

2×PCR Mix

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2×PCR Mix

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0.5M DTT    10ml
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