IL-6響應(yīng)型熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系是一種設(shè)計(jì)用于監(jiān)測(cè)IL-6（白細(xì)胞介素6）/IL-6受體相互作用的HEK293細(xì)胞系。這些細(xì)胞表達(dá)內(nèi)源性IL-6受體（IL-6R和gp130），并被工程化以在STAT響應(yīng)元件的控制下表達(dá)螢火蟲熒光素酶（圖1）。

該細(xì)胞系已驗(yàn)證對(duì)人類白細(xì)胞介素-6（IL-6）、IL-27有反應(yīng)，進(jìn)一步的功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，IL-6誘導(dǎo)的熒光素酶活性可被JAK抑制劑CP 690,550和抗IL-6R中和抗體降低。

背景

IL-6（白細(xì)胞介素-6）在炎癥發(fā)生時(shí)迅速產(chǎn)生，通過刺激急性期反應(yīng)、造血和免疫反應(yīng)，在宿主防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL-6通過作用于STAT3（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3）信號(hào)通路，對(duì)T細(xì)胞和B細(xì)胞產(chǎn)生刺激效應(yīng)。

IL-6表達(dá)失調(diào)對(duì)慢性炎癥、自身免疫和癌癥具有b理效應(yīng)。Il-6的表達(dá)在多個(gè)層面上受到調(diào)節(jié)，轉(zhuǎn)錄由多種刺激因素誘導(dǎo)，如TLR（Toll樣受體）配體、TNFα（腫瘤壞死因子α）和ROS（活性氧）。IL-6還涉及細(xì)胞衰老，并能觸發(fā)衰老引起的炎癥和與年齡相關(guān)的疾病。使用抗IL-6R抗體托珠單抗在治療RA（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）和Castleman病中取得了積極成果。因此，開發(fā)能夠靶向IL-6和IL-6信號(hào)通路的分子是一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域，可以作為預(yù)防和治療慢性炎癥性疾病和癌癥的有效策略。

圖1：IL-6響應(yīng)型熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系背后報(bào)告基因表達(dá)機(jī)制的示意圖。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品IL-6 響應(yīng)型熒光素酶報(bào)告基因 HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

? 監(jiān)測(cè)IL-6活性。

? 研究化合物對(duì)IL-6/IL-6R介導(dǎo)的信號(hào)通路的影響。

? 篩選抗IL-6或抗IL-6R抗體。

細(xì)胞培養(yǎng)協(xié)議

注意：HEK293細(xì)胞源自人類材料，因此建議采取適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施。

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約60秒。細(xì)胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部?jī)?nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1的試管中。在37°C水浴中放置細(xì)胞過久將導(dǎo)致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在5 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時(shí)后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好傳代。

5. 細(xì)胞應(yīng)在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1N。

細(xì)胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1N并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在生長培養(yǎng)基1N中重懸。

4. 按照推薦的亞培養(yǎng)比例1:5至1:10，每周一次或兩次將細(xì)胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1N并計(jì)數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，細(xì)胞濃度約為1 x 10^6個(gè)細(xì)胞/ml。

4. 將1 ml的細(xì)胞懸浮液分裝到每個(gè)冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時(shí)擴(kuò)增細(xì)胞并至少冷凍10個(gè)小瓶以備將來使用。

圖：IL-6響應(yīng)型熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞系對(duì)人類IL-27的劑量反應(yīng)曲線。

IL-6響應(yīng)型熒光素酶報(bào)告基因HEK293細(xì)胞與不同濃度的人類IL-27共培養(yǎng)過夜，并使用One-Step?熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量熒光素酶活性。結(jié)果以熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的誘導(dǎo)倍數(shù)顯示（與未刺激的細(xì)胞相比）。

文獻(xiàn)參考：

Tanaka T., et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Biol. 6(10):a016295.

Choy EH., et al., 2020, Nature Rev Rheumatol. 16:335-345.

Hirano T., 2021 International Immunology 33(3):127-148.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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