IL-23響應(yīng)型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系是一種工程化的HEK293細(xì)胞系，表達(dá)受STAT3響應(yīng)元件控制的螢火蟲熒光素酶，以及人類IL-23受體復(fù)合體（IL12Rβ1 NM_005535.3 和 IL23R NM_144701.3）。利用這一細(xì)胞系，可以通過測量熒光素酶活性來監(jiān)測IL-23活性。

IL-23響應(yīng)型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系的功能已通過使用重組人類白細(xì)胞介素23（人類IL-23；p19 + p40）的劑量反應(yīng)實驗、使用抗IL-23抗體烏司他木單抗和古塞庫單抗的抑制實驗，以及Janus激酶抑制劑魯索利替尼的實驗進(jìn)行了驗證。

背景

IL-23是由p40和p19組成的異源二聚體復(fù)合物，是一種由激活的巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子。這種細(xì)胞因子通過促進(jìn)輔助T細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ（IFN-γ）和支持分泌IL-17的CD4+ T細(xì)胞的增殖，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。由于它涉及多種自身免疫疾病，包括炎癥性腸病（IBD）、結(jié)腸炎、銀屑病和關(guān)節(jié)炎，目前正在大力開發(fā)能夠拮抗IL-23信號通路的試劑。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience熱銷產(chǎn)品IL-23 響應(yīng)型 STAT3 熒光素酶報告基因 HEK293 細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應(yīng)用

篩選和表征抗IL-23抗體

細(xì)胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細(xì)胞的小瓶大約60秒。細(xì)胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置細(xì)胞過久將導(dǎo)致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在5 ml預(yù)熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

3. 將重懸的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細(xì)胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞準(zhǔn)備好分裂。

5. 細(xì)胞應(yīng)在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1U。

細(xì)胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1U并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在生長培養(yǎng)基1U中重懸。

4. 按照推薦的亞培養(yǎng)比例1:5至1:8，每周一次或兩次將細(xì)胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細(xì)胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細(xì)胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞。

2. 一旦細(xì)胞分離，加入生長培養(yǎng)基1U并計數(shù)細(xì)胞。

3. 以300 x g的速度離心細(xì)胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，細(xì)胞濃度為1~2 x 10^6個細(xì)胞/ml。

4. 將1 ml的細(xì)胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時擴(kuò)增細(xì)胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖. 通過流式細(xì)胞儀分析IL-23響應(yīng)型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞系中IL23R和IL12Rβ1的表達(dá)。

IL-23響應(yīng)型STAT3熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞（綠色或粉紅色）或?qū)φ誗TAT3熒光素酶報告基因HEK293細(xì)胞（藍(lán)色）分別用人類IL12Rβ1 PE偶聯(lián)抗體（右圖；R&D系統(tǒng) #FAB839P）和人類IL23R PE偶聯(lián)抗體（左圖；R&D系統(tǒng) #FAB14001P）進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，并通過流式細(xì)胞儀分析。Y軸代表細(xì)胞數(shù)量百分比。X軸表示PE的強(qiáng)度。

文獻(xiàn)參考：

Yang K., et al., 2021 Am J Clin Dermatol. 22(2): 173-192.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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