雙縮脲總蛋白試劑

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

雙縮脲是一種用于分析蛋白質(zhì)的方法，雙縮脲反應(yīng)的原理是在呈藍(lán)色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下，銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復(fù)合物，呈紫色。所產(chǎn)生的顏色密度與參與反應(yīng)肽鍵數(shù)成比例?？赏ㄟ^(guò)比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長(zhǎng)為540nm。雙縮脲法測(cè)定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，但易受銅離子螯合劑影響，另外，對(duì)于血清總蛋白的雙縮脲分析，膽紅su、脂類、血紅蛋白、葡聚糖具有一定干擾作用。NobleRyder雙縮脲總蛋白試劑由硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉等組成，在10～160mg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，是對(duì)蛋白質(zhì)的精確定量分析試劑。

NobleRyder 雙縮脲總蛋白試劑 

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2.96孔板或離心管

操作步驟(僅供參考)：

1.取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液或稀釋液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中，充分溶解后配制成160mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。特別提示：待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。

例如待測(cè)蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。

2.將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔，加稀釋液補(bǔ)足至20μl。

3.加適當(dāng)體積待測(cè)蛋白樣本到96孔板的樣品孔中。如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測(cè)蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液相同，無(wú)需在待測(cè)蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液。

4.各孔加入200μl雙縮脲總蛋白試劑, 室溫放置10～15min。

5.測(cè)定540nm波長(zhǎng)處的吸光值，如無(wú)540nm，520～562nm之間的波長(zhǎng)也可。

6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

注意事項(xiàng)：

1、 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。

2、 待測(cè)蛋白和蛋白標(biāo)準(zhǔn)加入雙縮脲試劑后，如果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)效果不佳，可以室溫放置1h或60℃放置15min，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。顯色反應(yīng)也會(huì)隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。

3、 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有銅離子螯合劑。

4、 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)轭伾珪?huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大雙縮脲試劑的用量使總體積不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。

6、 檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)所有孔都呈暗紫色，可能原因是樣品含有還原劑，應(yīng)適當(dāng)透析或稀釋樣品。

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12個(gè)月有效。

NobleRyder 雙縮脲總蛋白試劑