服務(wù)簡介

幾乎所有的蛋白質(zhì)合成都起始于N-端，蛋白質(zhì)N-端的序列組成對于蛋白質(zhì)整體的生物學(xué)功能有著巨大的影響力。例如N-端序列影響蛋白質(zhì)的半衰期，同時關(guān)聯(lián)著蛋白亞細胞器定位等，對蛋白進行N-端測序分析，有利于幫助分析蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)，揭示蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。

對蛋白N端測序主要分類兩大類，其一為非質(zhì)譜技術(shù)，其二為質(zhì)譜技術(shù)。各自都有其使用的長處和制約之處。蛋白質(zhì)和多肽N-端測序技術(shù)是以Edman化學(xué)降解法為基礎(chǔ)的。Edman化學(xué)降解是測定蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的方法主要是從蛋白質(zhì)或多肽氨基酸末端進行分析，其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂與蛋白質(zhì)和多肽的N-端殘基的偶聯(lián)，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環(huán)化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉(zhuǎn)化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三個主要的化學(xué)步驟，每個循環(huán)從蛋白質(zhì)與多肽裂解一個氨基酸殘基，同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解，而后通過轉(zhuǎn)移的PTH-氨基酸鑒定實現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的測定。

百歐泰擁有多年的蛋白組學(xué)研究經(jīng)驗，同時擁有經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員，優(yōu)質(zhì)的測序儀器，應(yīng)用現(xiàn)有的質(zhì)譜技術(shù)平臺，可以提供高質(zhì)量的蛋白質(zhì)N端測序服務(wù)。采用完善Edman測序系統(tǒng)，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產(chǎn)物、蛋白品、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務(wù)。我們的不斷自我完善測序系統(tǒng)體系，通過Edman降解法可以確保精準(zhǔn)測定N端多個氨基酸的序列信息。

關(guān)鍵詞：N-端測序，Edman降解法，結(jié)構(gòu)分析

 服務(wù)步驟

1 樣品處理

蛋白樣品SDS-PAGE分離

PVDF膜轉(zhuǎn)移

2 上樣偶聯(lián)

 將異硫氰酸苯酯和蛋白質(zhì)或多肽N端氨基酸耦合，形成衍生物

3 樣品切割

將多肽或蛋白的N一端肽鍵選擇性的切斷

4 萃取

萃取出釋放的氨基酸衍生物

5 轉(zhuǎn)化

強酸性條件下轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的乙內(nèi)酰苯硫脲氨基酸

6 鑒定

以色譜法鑒定出降解下來的PTH-氨基酸種類，得到蛋白質(zhì)或多肽N端序列信息

該方法特點為：從N-段依次對氨基酸進行鑒定

7 交付（可商榷）

測序報告

質(zhì)譜參數(shù)

原始數(shù)據(jù)

服務(wù)應(yīng)用

1  蛋白表達產(chǎn)物的驗證

2  細胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物的驗證

3  蛋白降解/酶切分析

4  對于蛋白數(shù)據(jù)庫中不存在的全新蛋白序列進行分析

蛋白樣品需知

1 樣品純度不能太低，經(jīng)驗認為純度大于90%的蛋白才適用于測序反應(yīng)

2  N端封閉或糖基化的蛋白質(zhì)難以進行Edman反應(yīng)，無法測序

3  轉(zhuǎn)膜時應(yīng)用PVCF膜，不能使用NC膜

4  蛋白凍干粉純度大于95%可不轉(zhuǎn)膜，但緩沖液不能含鹽

服務(wù)優(yōu)勢

Edman化學(xué)降解法是常用且經(jīng)濟實惠的蛋白N端測序方法。綜合有以下特點：

?異硫氰酸苯酯與所有氨基酸殘基的反應(yīng)產(chǎn)率和回收率都相當(dāng)高，反應(yīng)副產(chǎn)物少

?色譜法鑒定結(jié)果較為精準(zhǔn)

?周期短

百歐泰團隊具有豐富的蛋白組學(xué)經(jīng)驗，可提供多種服務(wù)優(yōu)勢：

?采用成熟的質(zhì)譜分析技術(shù)，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠；

?服務(wù)為主：價格合理，可根據(jù)客戶需求綜合分析，為客戶提供滿意的結(jié)果；

?專業(yè)的技術(shù)支持，保障強力、周到及時的售前售后服務(wù)支持，隨時為您解答出現(xiàn)的任何問題。

服務(wù)流程

雙方溝通一致后確定實驗方案，確定服務(wù)要求-簽訂合同—預(yù)付款-開始實驗-成果交付

相關(guān)產(chǎn)品推薦

天然蛋白 重組蛋白 小分子抗原抗體 

相關(guān)服務(wù)推薦

酵母蛋白表達系統(tǒng) 乳酸菌蛋白表達系統(tǒng) 桿狀病毒-昆蟲蛋白表達系統(tǒng) 哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng) 枯草芽孢桿菌蛋白表達系統(tǒng) 小分子抗原的制備及偶聯(lián)服務(wù) 大規(guī)模蛋白發(fā)酵服務(wù)  蛋白純化服務(wù)