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沒食子酸含量檢測(cè)--高效液相

來源:上海茁彩生物科技有限公司   2025年02月10日 08:44  

沒食子酸又名五倍子酸,是一種有機(jī)酸,多酚類有機(jī)物。名稱為3,4,5-三羥基苯甲酸,化學(xué)式為C7H6O5。它廣泛存在于五倍子、漆樹、掌葉大黃、大葉桉、山茱萸等植物中。沒食子酸易溶于水、醇和醚;具有酚及羧酸的性質(zhì)。制備方法有酸水解法、堿水解法、發(fā)酵法、酶法等,在制藥、墨水、染料、食品、有機(jī)合成等方面有廣泛的應(yīng)用。沒食子酸是中藥材提取物,具有多種生物活性,比如抗炎、抗氧化、抑菌等作用。沒食子酸與三價(jià)鐵離子生成藍(lán)黑色沉淀,是藍(lán)黑墨水的原料。

高效液相色譜法(HPLC)是檢測(cè)沒食子酸含量的常用方法。

色譜條件:反相C18色譜柱,柱溫25℃;以甲醇和0.5%的磷酸為流動(dòng)相,流速0.8-1ml/min,進(jìn)樣量10-20ul;紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)273nm。確保具有良好的線性關(guān)系和回收率,標(biāo)準(zhǔn)偏差在規(guī)定的范圍內(nèi)。 樣品制備:精密稱量樣品1g,置于50ml容量瓶中,加入30ml甲醇,超聲1h。加入甲醇,定容到刻度,搖勻,過濾。 標(biāo)準(zhǔn)品制備:稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品2mg,放入50ml容量瓶中,用甲醇定容到刻度,搖勻備用。 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:梯度稀釋沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品,至少6個(gè)點(diǎn),分別用甲醇定容到刻度,搖勻。以上述的色譜條件,進(jìn)樣到hplc,測(cè)定色譜圖,記錄數(shù)據(jù)。以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程和回收率,確保具有良好的線性關(guān)系。 樣品測(cè)定和計(jì)算:在色譜條件下,吸取樣品樣品溶液10ul,進(jìn)樣測(cè)定色譜峰面積。如果濃度過高,先稀釋,再進(jìn)樣,確保峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。根據(jù)回歸方程和樣品的色譜峰面積,可以計(jì)算出樣品沒食子酸的含量,考慮回收率。


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