293T貼壁細胞轉染
貼壁細胞siRNA轉染步驟:
1、合成siRNA時請帶熒光,若siRNA不帶熒光、請使用熒光對照,方便查看轉染效率
2、siRNA濃度:20uM/L
3、siRNA和轉染試劑復合物制備:siRNA 8ul和轉染試劑8ul,吹打混勻室溫靜置15分鐘,無需另外加入任何試劑稀釋
4、細胞轉染前狀態(tài):拍明場細胞照片留存
5、貼壁細胞鋪板:6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗,細胞密度:60%左右(不同細胞,按48小時生長到90%,往前推算細胞鋪板密度)
6、轉染:將復合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)
7、換液:轉染24小時后培養(yǎng)基換液
8、轉染效率:轉染48小時后拍熒光照片,查看轉染效率
9、轉染后細胞狀態(tài):拍明場細胞狀態(tài)照片
10、檢測:總計轉染48小時后提取RNA或蛋白檢測
貼壁細胞質粒轉染步驟:
1、質粒提?。菏褂脽o內毒素提取試劑盒
2、質粒溶解:溶于超純水或雙蒸水,一定不能溶于試劑盒Buffer等其他試劑
3、質粒熒光:若質粒不帶熒光、請使用熒光對照,方便查看轉染效率
4、質粒濃度:500-600ng/ul
5、質粒和轉染試劑復合物制備:取質粒8ug和轉染試劑8ul混合,吹打混勻室溫靜置15分鐘,無需另外加入任何試劑稀釋
6、細胞轉染前狀態(tài):拍照片留存
7、貼壁細胞鋪板:6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗,細胞密度:60%左右
8、轉染:將復合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)
9、換液:轉染24小時后培養(yǎng)基換液
10、轉染效率:轉染48小時后拍熒光照片,查看轉染效率
11、轉染后細胞狀態(tài):拍明場細胞狀態(tài)照片
12、檢測:總計轉染48小時后提取RNA或蛋白檢測
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