當(dāng)遇到色譜泵的柱壓的問(wèn)題,使用者可能反應(yīng)是色譜柱出了問(wèn)題。這里說(shuō)明一下,并不一定是色譜柱的問(wèn)題,也可能是儀器系統(tǒng)出現(xiàn)了問(wèn)題。
1.首先需要確認(rèn)是儀器系統(tǒng)問(wèn)題還是色譜柱問(wèn)題。將色譜柱更換為兩通,開(kāi)啟色譜泵后,若系統(tǒng)反壓高,說(shuō)明儀器系統(tǒng)存在問(wèn)題,若系統(tǒng)反壓歸零或很小,說(shuō)明色譜柱存在問(wèn)題。
2.若確認(rèn)是色譜柱的問(wèn)題導(dǎo)致柱壓升高時(shí),造成色譜柱柱壓高的原因包括物理顆粒堵塞或化學(xué)污染物。
3.當(dāng)儀器系統(tǒng)存在壓力高的問(wèn)題時(shí),需要分段排查,可按照柱后端管路、柱前端管路、進(jìn)樣閥、色譜泵的順序來(lái)依次確認(rèn)是哪里的問(wèn)題導(dǎo)致,并進(jìn)行清洗或更換零部件。
色譜泵的柱壓高,情況相對(duì)較復(fù)雜,下面我們重點(diǎn)講述:
I、樣品沉淀
樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑不一致時(shí),樣品進(jìn)入色譜柱中時(shí)可能會(huì)因溶解度下降而出現(xiàn)沉淀,造成柱壓升高。
II、鹽析
使用高濃度緩沖鹽溶液做流動(dòng)相時(shí),流速設(shè)置過(guò)低,導(dǎo)致流動(dòng)相中鹽成分析出;或者使用高濃度緩沖鹽流動(dòng)相后液相色譜系統(tǒng)(包括色譜柱)沖洗不*,從而導(dǎo)致緩沖鹽溶液流動(dòng)相中的鹽成分殘留在色譜柱中,再次使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)柱壓高的現(xiàn)象。
III、更換流動(dòng)相前未充分沖洗系統(tǒng)
當(dāng)更換流動(dòng)相時(shí),未*沖洗系統(tǒng),致使不同性質(zhì)、互不相溶的流動(dòng)相存在于一個(gè)體系中,也容易導(dǎo)致柱壓升高。對(duì)于不同性質(zhì)、互不相溶的流動(dòng)相可事先用混溶溶劑(比如異丙醇)沖洗系統(tǒng)再更換新的流動(dòng)相;在使用含鹽流動(dòng)相時(shí),須先用不含鹽高比例水相(e.g.有機(jī)相:水=10:90)沖洗過(guò)渡色譜系統(tǒng),以防止鹽析堵塞系統(tǒng)而導(dǎo)致柱壓升高。
IV、色譜柱篩板堵塞
較容易導(dǎo)致色譜柱柱壓升高的原因之一為色譜柱篩板或柱頭發(fā)生了堵塞,這往往是由于流動(dòng)相沒(méi)有過(guò)濾或者雖已過(guò)濾但過(guò)濾方法不當(dāng)(比如使用了孔徑過(guò)大的濾膜、濾膜損壞、濾膜材質(zhì)選擇不當(dāng)?shù)龋?dǎo)致固體雜質(zhì)顆粒滯留在篩板上造成的。
V、其它
色譜系統(tǒng)故障導(dǎo)致的其它堵塞也會(huì)表現(xiàn)為柱壓高,比如:液相泵單向閥堵塞、管路堵塞等。此類情況可以通過(guò)拆下色譜柱觀察壓力是否恢復(fù)正常的方法進(jìn)行排查。
色譜泵的柱壓?jiǎn)栴}具體預(yù)防和解決措施:
I.測(cè)試樣品溶劑與流動(dòng)相兼容性以及樣品過(guò)濾膜過(guò)濾;
II.確認(rèn)方法參數(shù)準(zhǔn)確合理;
III.分析強(qiáng)保留樣品或含緩沖鹽的流動(dòng)相體系,及時(shí)沖洗色譜柱;
IV.引入預(yù)柱或在線過(guò)濾器,減少化學(xué)吸附與物理顆粒對(duì)色譜柱的污染;
V.更換液相單向閥或堵塞管路。