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特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶， ENGase 廣泛應(yīng)用于需要糖肽、糖蛋白和糖復(fù)合物的均質(zhì)糖苷的合成應(yīng)用中。 治療性單克隆抗體的聚糖重構(gòu)尤其重要，因?yàn)榫厶墙Y(jié)構(gòu)影響抗體效應(yīng)器功能、穩(wěn)定性和藥代動力學(xué)/藥效學(xué)。

為了控制Fc-N-聚糖，我們進(jìn)行了Fc-N-聚糖從異構(gòu)N-糖基化模式重排為用化學(xué)酶法與兩種類型的內(nèi)-β-乙?；铣赏|(zhì)N-聚糖氨基葡糖苷酶（ENG’ases），一種作為水解酶切割所有異構(gòu)體的酶N-聚糖，另一種用作糖苷合成酶以產(chǎn)生均勻的N-聚糖。

作為起始材料，我們使用了轉(zhuǎn)基因家蠶中產(chǎn)生的抗Her2抗體

繭，由非巖藻糖基少甘露糖型（Man2-3GlcNAc2）、高甘露糖組成

型（Man4-9GlcNAc2）和復(fù)合型（Man3GlcNAc3-4）N-聚糖。因此

幾種ENG’ase（endoS、endoM、endoD、endoH和endoLL）的裂解

抗體上的聚糖通過endoS、endoD和endoLL的組合。接下來，所需的N-聚糖（M3；Man3-

GlcNAc1、G0；GlcNAc2Man3GlcNAc1、G2；Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1，A2；NeuAc2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1）

從相應(yīng)的惡唑啉轉(zhuǎn)移到具有ENG’ase突變體（endo-S-D233Q）的完整抗Her2抗體上的GlcNAc殘基，并且

獲得了糖工程化的抗Her2抗體?？笻er2抗體的結(jié)合測定具有FcγRIIIa-V158的同質(zhì)N-聚糖表明γRIIIa-V158的親和力。此外，糖工程抗Her2的ADCC測定使用SKBR-3和BT474進(jìn)行抗體（mAb-M3、mAb-G0、mAb-G2和mAb-A2）并揭示了糖型影響ADCC活性。

特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶