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一、布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:布魯氏菌病抗體試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Brucella(ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
三、預(yù)期用途 布魯氏菌病是由布魯氏菌(Brucella)引起的人、畜共患傳染病,其特征是生殖器官和胎膜炎,引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病灶。
布魯氏菌病抗體試劑盒用于檢測(cè)牛、羊血清中布魯氏桿菌抗體,可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評(píng)價(jià)或該病的輔助診斷。
四、試劑盒原理
布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒由預(yù)包被布魯氏菌抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體工作液及其他配套試劑組成,應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)牛羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本及酶標(biāo)記物、抗體工作液,經(jīng)溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體,則將與抗體工作液競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)板上抗原,酶標(biāo)記物與抗體工作液及酶標(biāo)板上抗原形成復(fù)合結(jié)合物;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分,在孔中加TMB底物液,若樣品中含有布魯氏菌抗體則將阻斷酶標(biāo)記物、抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色;反之則出現(xiàn)顯色;顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。
五、試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
3.用工作洗滌液將待檢牛血清先按10倍稀釋(如10μl血清加入90μl工作洗滌液中,混勻),待檢羊血清按25倍稀釋(如4μl血清加入96μl工作洗滌液中,混勻),陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl;樣品孔每孔先加入稀釋后的血清樣品50μl。
然后每孔依次加入50μl酶標(biāo)記物、50ul抗體工作液。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)45分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)15分鐘。
7.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。