在細(xì)胞培養(yǎng)中，良好的實(shí)驗(yàn)規(guī)范和定期檢測(cè)支原體污染也十分必要。支原體檢測(cè)試劑盒支原體檢測(cè)的方法有很多種，如直接培養(yǎng)、DNA 熒光染色、ELISA和PCR法等。支原體檢測(cè)試劑盒主要采用PCR方法對(duì)各種生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）支原體感染的檢測(cè)。通過PCR方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞等生物材料中的支原體，所用引物為根據(jù)支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)，只特異性擴(kuò)增支原體 DNA，檢出靈敏度與特異性均較高。PCR擴(kuò)增及電泳分析只需數(shù)個(gè)小時(shí)，操作方便簡(jiǎn)單。

二、產(chǎn)品特點(diǎn)

方法學(xué)：PCR法

特點(diǎn)：靈敏、特異、快速，操作簡(jiǎn)便

三、產(chǎn)品成分

四、使用說明

(請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說明后再開始相關(guān)實(shí)驗(yàn))

1.待測(cè)細(xì)胞連續(xù)傳代3次或培養(yǎng)至兩周；

2.細(xì)胞達(dá)到80% confluency或以上的時(shí)候，取1ml上清，進(jìn)行低速離心（300g，5min，4℃）；

3.離心結(jié)束后取950μl上清液，轉(zhuǎn)移至新的無菌EP管中，以去除培養(yǎng)基中的細(xì)胞；

4.將上清液高速離心（12000g，10min，4℃），離心結(jié)束后，去除900μl上清，剩余50ul用以重懸沉淀（可能肉眼不可見）；

5.將重懸好的沉淀放置4度冰箱，作為PCR的模板備用；

根據(jù)下表，配制PCR反應(yīng)液：

★注：為防止Positive Control Template 污染，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組加完以后，最后再將C液加入陽性對(duì)照組

6.PCR程序

7.制備DNA gel：稱取一定量Argrose粉末，用1X TAE buffer配制成1.5%的DNA GEL；

8.待PCR反應(yīng)結(jié)束后，取8-10μl的PCR 反應(yīng)液（無需要加 loading buffer）直接進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9.目的條帶為518bp。示例如下：

五、推薦使用頻率