本試劑盒采用雙抗體夾心兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)校準(zhǔn)品和待測樣本，再加入shengwusu標(biāo)記抗體，經(jīng)過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯(lián)的親和素，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-shengwusu標(biāo)記抗體-親和素酶的夾心復(fù)合物。加底物A和B，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)的濃度。
操作步驟
推薦樣本稀釋方案：建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索樣本適合稀釋倍數(shù)，然后再做正式實(shí)驗(yàn)。
所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、yangben稀釋液孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，yangben稀釋液孔加yangben稀釋液50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。除空白孔外，每孔加入shengwusu抗體100uL，用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育60min。
4、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)5次。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP標(biāo)記親和素100uL，用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育20min。
6、重復(fù)步驟4。
7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育15min。
所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、yangben稀釋液孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，yangben稀釋液孔加yangben稀釋液50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。除空白孔外，每孔加入shengwusu抗體100uL，用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育60min。
4、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)5次。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP標(biāo)記親和素100uL，用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育20min。
6、重復(fù)步驟4。
7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育15min。
8、所有孔加入終止液50μL，在450nm波長酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
備注：圖片僅供參考。僅供科研，不可用于臨床。
化工儀器網(wǎng)