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詳細介紹
DH10B-Plus 感受態(tài)細胞用電擊法轉(zhuǎn)化的效率較高，故不推薦使用熱激法化學(xué)轉(zhuǎn)化。DH10B-Plus 菌
株來源于 DH10B 菌株，在 DH10B 菌株中引入 Hte 突變，提高了細胞膜的通透性和對瞬時高壓的耐
受進而提高了電擊轉(zhuǎn)化效率。DH10B-Plus 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA
(無論真核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉(zhuǎn)入 DH10B-Plus 中)。recA1 和 endA1 的
突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取， lacZΔM15 標(biāo)記的存在使 DH10B-Plus 可
用于藍白斑篩選。DH10B-Plus 電擊感受態(tài)細胞具有鏈m素和四環(huán)s抗性，適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或
各種文庫構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝處理，pUC18 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達 1010 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
DH10B-plus 感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697
galE15 galK λ- rpsL nupG Hte (TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，轉(zhuǎn)入冰上預(yù)冷的電擊轉(zhuǎn)化杯中；
3. 使用電轉(zhuǎn)儀進行電擊轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)化參數(shù)為：2mm 電擊杯，2.5kv，200Ω，電轉(zhuǎn)化時間一般為 4-5 ms
左右）；
4. 電擊后迅速取出電擊杯，向其中加入 900 μL 液體 LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后
置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰上解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 不應(yīng)含有較高的離子強度，建議總體積不超過 5 μl，一般為 1-2 μl；
3. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，電轉(zhuǎn)化杯一定要在冰上預(yù)冷；
4. 如使用 1 mm 電擊杯，則轉(zhuǎn)化參數(shù)改為 1.25 kv 和 200 Ω。
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