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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Stable 高轉(zhuǎn)化效率菌株是逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，特別適合于慢病毒或具有末
端重復(fù)序列 DNA 片段的克隆。基因組含有 recA1 和 relA1 突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重
組，降低錯(cuò)誤重組的概率；同時(shí)含有核酸酶 endA1 突變，避免了提取質(zhì)粒過程中核酸酶的污染，大
大提高了高純度病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于藍(lán)、白斑篩選，此菌株
具有四環(huán)素和鏈m素抗性。利用該菌株克隆含有重復(fù)序列的 DNA 時(shí)，推薦在 30 ℃進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)
pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，Stable 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Stable
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F' proAB lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- φ80
?lacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 30 ℃預(yù)熱），后置于 30 ℃搖床復(fù)壯 60 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上：若克隆的質(zhì)粒中含有重復(fù)
序列時(shí)，將平板置于于 30 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h；否則，則可以將平板置于 37 ℃過夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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