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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
ArcticExpress (DE3)來(lái)源于 E. coli B 菌株，為 Lon 和 OmpT 蛋白m缺陷型菌株，可促進(jìn)表達(dá)蛋白的
穩(wěn)定。ArcticExpress (DE3)菌株染色體 DNA 中整合了λ噬菌體 DE3 區(qū)，使得 ArcticExpress (DE3)菌
株可同時(shí)表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶，廣泛用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等質(zhì)粒
的蛋白表達(dá)。ArcticExpress (DE3)菌株具有四環(huán)s，慶大m素抗性，endA1 突變有利于質(zhì)粒 DNA 的
穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使 ArcticExpress (DE3)可以表達(dá)適應(yīng)低溫的伴侶蛋白 Cpn10 和
Cpn60（來(lái)自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10 和 Cpn60 伴侶蛋白在 4 - 12 ℃表現(xiàn)出較高活性，
在 ArcticExpress (DE3)細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達(dá)量
及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達(dá)伴侶蛋白 GroEL、GroES 等具有更加優(yōu)異的促融性能。吐露港生產(chǎn)
的 ArcticExpress (DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
ArcticExpress(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：E. coli B F– ompT hsdS (rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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