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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Rosetta-gami B 系列菌株來(lái)源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列和 Origami
系列菌株的優(yōu)點(diǎn)。菌株含有 pLacIRARE 質(zhì)粒，能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG,
AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密碼子的 tRNA，提高了真核細(xì)胞蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)水
平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時(shí)含有突變，這使得該菌株
能夠更加高效地在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于表達(dá)含二硫鍵的活性蛋白。菌株帶有氯m素、卡
那和四環(huán)素抗性，無(wú)法用于轉(zhuǎn)化含這些抗性的質(zhì)粒。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株含有溶源的
λDE3，可以表達(dá) T7 RNA 聚合酶，適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動(dòng)子系列載體。此外，
pLacIRARE 質(zhì)粒能夠額外表達(dá) lac 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白，從而抑制了 lac 啟動(dòng)子的本底表達(dá)水平。
pLacIRARE 質(zhì)粒的起始復(fù)制位點(diǎn)是 p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質(zhì)粒互
相共存。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/μg DNA
以上。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami B (DE3) pLacI
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLacIRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pLacIRARE 質(zhì)粒外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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