詳細介紹
產(chǎn)品簡介
Tuner 系列菌株是 lacZY 刪除的 BL21 突變菌株,其中 lacY 的突變使得 IPTG 能夠進入所有細胞的胞
內(nèi),從而使得蛋白的誘導水平具有 IPTG 的濃度依賴性。當與 pET 系列載體聯(lián)合使用時,可使蛋白
的表達量從低表達水平到超高表達水平的范圍內(nèi)進行有效的調(diào)節(jié);而在蛋白表達水平低的情況下,
目的蛋白可能會呈現(xiàn)更好的可溶性和活性。因此,Tuner系列菌株的蛋白表達水平可以通過IPTG濃
度來進行精確而嚴謹?shù)恼{(diào)控。此外,Tuner 系列菌株還是 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株。由于該
菌株不含有 λDE3序列,不表達 T7 RNA 聚合酶,因此不能用于 T7啟動子系列質(zhì)粒的蛋白表達。經(jīng)
pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測,Tuner 感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率可達 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Tuner
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm lacY1
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔