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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
Tuner(DE3)菌株是 BL21 菌株的 lacZY 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株，此突變導致 IPTG 以均一
速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴。將具有氯m素抗性的
pLysS 質(zhì)粒導入 Tuner(DE3)細胞中即是 Tuner(DE3) pLysS，其中 pLysS 表達 T7 溶菌m，可與 T7
RNA 聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性，進而降低目標蛋白的本底表達水平，但不干擾 IPTG 誘導的表達，
因而非常適合毒性蛋白的原核表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體 DE3 區(qū) (DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體
RNA 聚合酶)，可同時表達 T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX，
pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達。Tuner(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效
率達 107 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Tuner(DE3)pLysS
感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm lacY1 λ(DE3) pLysS CamR
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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