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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而來(lái)，為 C58 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基
因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105
(pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T
DNA 順利轉(zhuǎn)移)。EHA105 菌株適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 EHA105 化
學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液
氮冷凍 5 分鐘（或干冰乙醇浴和-80 ℃冰凍）、37 ℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；
3.加入 900 μl 無(wú)抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB
平板上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí)，28℃培養(yǎng) 48h 即可；平板
中同時(shí)加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要
28℃培養(yǎng) 72-90 h）。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，利f平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。
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