HB101：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F- mcrB mrr hsdS20(r_B^- m_B^-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((str^R) glnV44λ^-

產(chǎn)品說明

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產(chǎn)物（同時也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長片段末端重復區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內切酶系統(tǒng)，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量；此菌株具有鏈霉素抗性；不存在lacI^qZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。HB101感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×10⁸cfu/μg DNA。 

操作方法

1. HB101感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。