XL2-Blue:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                               -80℃（6個月）

基因型

Tet^R Δ(mcrA)183 Hte [F? {proAB lacI^q lacZΔM15 Tn10 (Tet^R) Amy Cam^R}] Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1

產(chǎn)品說明

XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte (high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉化效率及大質(zhì)粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40 kd質(zhì)粒的構建。Hte使得XL2-Blue適用于大質(zhì)粒DNA和重組產(chǎn)物的轉化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫構建。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdSMR突變導致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。lacZΔM15的存在使XL2-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>10⁹ cfu/μg DNA。 

操作方法

1. XL2-Blue感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少14 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。