2× FastPfu Premix 酶

是將PCR反應(yīng)中用到的高保真FastPfu DNA聚合酶、buffer、dNTP Mixture以及穩(wěn)定劑以2倍的終濃度進(jìn)行混合。使用時(shí)，只需要在制品溶液中加入模板和引物便可進(jìn)行PCR反應(yīng)，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，降低了PCR操作過(guò)程中污染的可能性。

 2× FastPfu Premix 酶 

1. 在冰浴上設(shè)置 PCR 反應(yīng)（供參考）*：

模板: < 500 ng

2× Tolo FastPfu Premix: 25 μL

Primer 1/2: 0.2 - 1.0 μM (final conc.)

滅菌蒸餾水 Up to 50 μL

2. PCR 反應(yīng)參數(shù)（供參考）**：

(起始變性): 95 ℃  5 min

(解鏈): 98 ℃  5 sec

(退火): 55 ℃ 30 sec

(延伸): 72 ℃ x min （30-35 循環(huán)：2 kb/min）

(終延伸): 72 ℃  7 min

(臨時(shí)保存): 16 ℃ 保溫

(終延伸): 72 ℃ 10 min 

* 針對(duì)不同類(lèi)型的模板，所需的模板量會(huì)有不同，如基因組和質(zhì)粒，等等；需要根據(jù)實(shí)際情況，添加合適的模板量。

** 退火溫度需根據(jù)引物和模板實(shí)際的 G+C 含量來(lái)作調(diào)