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Calcein-AM是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，Calcein-AM由于在Calcein的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。當(dāng)其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解為Calcein 留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑(如BCBCF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate)相比，Calcein-AM作為熒光探針去染活細(xì)胞的，因?yàn)樗募?xì)胞毒性很低。Calcein 的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為490 nm和515 nm. Calcein -AM僅對(duì)活細(xì)胞染色。作為核染色染料的PI不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā): 488， 545nm， 發(fā)射: 617 nm), 因此PI僅對(duì)死細(xì)胞染色。由于Calcein-DNA和PI-DNA都可被490nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn)，Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。