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TUNEL 法的實驗原理
基本原理:對不同組織切片先增加細胞膜通透性,然后讓 rTDT 和生物標記的 dTUTP 進入細胞內,在 rTDT 的輔助下 dTUTP 與核斷裂的 DNA 3』-OH 結合,再用 HRP 標記的鏈霉親和素與 dTUTP 上的 biotin 結合(每個鏈霉親和素至少可以再結合 3 個 biotin 分子),后用 DAB、過氧化氫與 SP 上的辣根過氧化物酶 HRP 發(fā)生氧化、環(huán)化反應,形成苯乙肼聚合物而呈現(xiàn)棕褐色,終通過計數(shù)每張切片上不同視野中 TUNEL 陽性細胞的比例來判斷細胞凋亡發(fā)生情況。
冰凍切片:取下的新鮮組織應立即放入超低溫冰箱或者液氮中,用干冰運輸,固定好的切片應于-80或者-20度保存,并盡快用于檢測;
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