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日本生研 莢膜型肺炎鏈球菌8種混合血清(日本生研)
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但實(shí)驗(yàn)證明,大多數(shù)限制酶對(duì)裸露的酶切位點(diǎn)不能有效切斷。尤其當(dāng)酶切位點(diǎn)位于片段末端時(shí),通常的限制性內(nèi)切酶的酶切效率都很低,有的酶甚至不能切斷。因此,為了將PCR產(chǎn)物直接克隆到目的載體,就需要在設(shè)計(jì)引物時(shí)在酶切位點(diǎn)兩端加入1-3個(gè)堿基的保護(hù)性堿基,才能使所設(shè)計(jì)的限制酶對(duì)其識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行有效切斷(參考文獻(xiàn):Zimmermann K, Sch?gl D, Mannhalter JW. Digestion of terminal restriction endonuclease recognition sites on PCR products. Biotechniques, 1998,24(4):582-584. )。
有人對(duì)十余種常用的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),分別比較了各種限制酶在其酶切位點(diǎn)末端分別加1、2、3個(gè)保護(hù)堿基和不加保護(hù)性堿基的切斷情況。表中的:(-) 為不能切斷;(±) 為部分切斷;(+) 為能*切斷。
結(jié)果顯示,基本上所有限制酶,在其酶切位點(diǎn)旁邊加上3個(gè)以上的保護(hù)堿基后,都可以對(duì)其酶切位點(diǎn)進(jìn)行有效切斷。因此在進(jìn)行PCR產(chǎn)物克隆實(shí)驗(yàn)時(shí),在設(shè)計(jì)引物的時(shí)候通常要在末端再添加3個(gè)堿基,即保護(hù)性堿基。當(dāng)然,如果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)先將PCR產(chǎn)物克隆到T載體,再亞克隆到目的載體,那么添不添加保護(hù)性堿基都可以。
做蛋白的人幾乎都會(huì)涉及到包涵體的變性溶解與復(fù)性。在包涵體的變性溶解及復(fù)性過(guò)程中常用的試劑是鹽酸胍和尿素,那么這兩種試劑有什么區(qū)別呢?