日本生研公司自創(chuàng)立以來約50年，一直在開發(fā)人類疾病的診斷、治療、預(yù)防為主的疫苗和檢驗(yàn)試劑。日本生研的細(xì)菌診斷試劑世界，其細(xì)菌分型抗血清的產(chǎn)品基本上壟斷臨床微生物市場(chǎng)和日本的公共衛(wèi)生檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。日本生研莢膜型流感菌檢測(cè)用免疫血清（a-f型）
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日本生研莢膜型流感菌檢測(cè)用免疫血清（a-f型）

廣州健侖生物科技有限公司

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廣州健侖生物有代理日本生研、丹麥SSI、德國Sifin、泰國血清：

我司還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒：登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、乙肝、寨卡、黃熱病、黑熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。

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6、實(shí)驗(yàn)人員：戴一次性口罩、 帽子、手套，實(shí)驗(yàn)過程中手套要勤換。
7、設(shè)置RNA操作實(shí)驗(yàn)室，所有器械等應(yīng)為。
二、常用的RNA酶抑制劑
1、焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。
2、硫氰酸胍：目前被認(rèn)為是有效的RNA酶抑制劑，它在裂解組織的同時(shí)也使RNA酶失活。它既可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來，又對(duì)RNA酶有強(qiáng)烈的變性作用。
3、氧釩核糖核苷復(fù)合物：由氧化釩離子和核苷形成的復(fù)合物，它和RNA酶結(jié)合形成過渡態(tài)類物質(zhì)，幾乎能*抑制RNA酶的活性。
4、RNA酶的蛋白抑制劑（RNasin）：從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可以和多種RNA酶結(jié)合，使其失活。
5、其它：SDS、尿素、硅藻土等對(duì)RNA酶也有一定抑制作用。
在利用昆明鼠或BALB/c鼠進(jìn)行免疫的時(shí)候，不論是用來制備單克隆抗體還是檢測(cè)目的蛋白的抗原性都可以使用與制備單抗相同的免疫方案。常用的多肽或蛋白類抗原腹腔免疫小鼠的方式和免疫劑量：
1、*免疫用50ug抗原（可溶性的）溶解于100或150ul的生理鹽水或是PBS，加入等量的弗氏*佐劑充分乳化后進(jìn)行小鼠腹腔注射，注射體積不超過0.5ml/只小鼠。
2、兩周后，用同樣的劑量和同樣的抗原進(jìn)行腹腔免疫，通常情況下這次免疫佐劑為弗氏不*佐劑，但也有用弗氏*佐劑。

3、三周后用50ug抗原溶解于100或150ul的生理鹽水或是PBS，加入等量的弗氏不*佐劑充分乳化后腹腔注射。

4、兩周后50-80ug的抗原加入生理鹽水到200ul行腹腔注射，三天后尾靜脈取血測(cè)效價(jià)確定下一步實(shí)驗(yàn)方案。

抗原與佐劑的乳化

抗原乳化前，應(yīng)檢查抗原管有否顆粒狀沉淀，如有沉淀，應(yīng)超聲粉碎后再用。用2-5ml注射器，取含抗原的溶液，另一支注射器?。ǖ润w積）福氏*佐劑或不*佐劑，用不銹鋼連接接頭連接，反復(fù)推拉混合約10-30分鐘，平放靜置30分鐘，如水乳相不再分離，即乳化*，可注射小鼠。
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是Notomi等于2000年開發(fā)的一種恒溫核酸擴(kuò)增方法。其特點(diǎn)是針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在等溫條件(65℃左右)保溫幾十分鐘，即可完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)。不需要模板的熱變性、長時(shí)間溫度循環(huán)、繁瑣的電泳、紫外觀察等過程。LAMP 是一種嶄新的DNA擴(kuò)增方法，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，具有替代PCR方法的可能性

LAMP PCR

溫 度 反應(yīng)全程恒溫 必須要有熱循環(huán)

時(shí) 間 約１５～６０分鐘 ２～３小時(shí)

產(chǎn) 物 量 約１０^１０倍 (100億倍) 約１０^７倍 (1千萬倍)

特 異 性 *，６區(qū)域 ４ 引物 ２區(qū)域 ２ 引物

檢 測(cè) 無需其他檢測(cè)步驟，根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)發(fā)生與否判斷 需其他檢測(cè)步驟，如電泳

試 劑 無需特殊試劑 無需特殊試劑

一、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）的原理