FITC標記多糖(葡聚糖 聚蔗糖 菊糖 )

FITC葡聚糖
FITC-DEAE-葡聚糖(FDD)
FITC-羧甲基-葡聚糖（FCM-葡聚糖）
FITC-聚蔗糖(FITC-Ficoll^®)
FITC-DEAE-聚蔗糖
FITC-CM-聚蔗糖(FITC-CM-Ficoll^®)
FITC-菊糖
熒光素透明質(zhì)酸(FHA-Se)
TRITC標記多糖
TRITC-聚蔗糖(TRITC-Ficoll^®)
四甲基羅丹明透明質(zhì)酸(TR-HA)
 

產(chǎn)品一：FITC葡聚糖-熒光素異硫氰酸酯葡聚糖

化學(xué)名：

葡聚糖(3´,6´-二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃--1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
熒光素異硫氰酸酯 - 葡聚糖
熒光素基硫代氨基甲?；?- 葡聚糖

CAS號：60842-46-8

結(jié)構(gòu)

定義
MW：重均分子量
Mn：數(shù)均分子量
DS：定義為多糖鏈中每個糖分子上取代分子的數(shù)目

特性

用熒光素對基于天然葡聚糖B512F所制備的特選葡聚糖組分進行標記，標記時采用穩(wěn)定的硫代氨基甲酰鍵連接基團，標記步驟不會導(dǎo)致葡聚糖發(fā)生任何降解¹，F(xiàn)ITC-葡聚糖的DS范圍為0.002-0.008，在該取代低水平范圍內(nèi)，反應(yīng)對葡聚糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。這一點對滲透性研究而言非常重要。

FITC-葡聚糖以黃色/橙色粉末形式供應(yīng)，其在水中可以自由溶解，也可以黃色溶液形態(tài)的鹽溶液形式供應(yīng)。該產(chǎn)品也可溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低級脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺。可以通過在劇烈攪拌下將粉末緩慢加入到溫水（約60℃）中來實現(xiàn)高分子量組分的溶解。

分子量大于5 000道爾頓的葡聚糖分子在溶液中表現(xiàn)為柔性線團型（coil）鏈段。表1（下表）顯示了不同分子量分子的尺寸。葡聚糖和FITC-葡聚糖呈現(xiàn)牛頓流動特性，即粘度與剪切速率無關(guān)。

表1.葡聚糖的分子尺寸。

光譜數(shù)據(jù)

圖1. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-葡聚糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：495nm；發(fā)射波長：520 nm。

圖2.FITC-葡聚糖在pH 4-9范圍內(nèi)的熒光光譜（發(fā)射波長：520nm）

儲存和穩(wěn)定性

FITC-葡聚糖在體外和體內(nèi)的穩(wěn)定性都非常好——只有在高pH（> 9）和高溫下，熒光素標記才有發(fā)生水解的風(fēng)險。在37°C的兔血漿、肌勻漿、肝勻漿和尿液研究中，F(xiàn)ITC-葡聚糖的穩(wěn)定期均不短于3天，Mw無任何變化，熒光素組分釋放不可見。 在6％的TCA中，F(xiàn)ITC-葡聚糖可以在室溫下穩(wěn)定3天²。高壓滅菌的FITC-葡聚糖70溶液可以在8至50℃下儲存長達5個月，只有50℃樣品中的游離氨基-熒光素含量出現(xiàn)略微增加（1％）。FITC-葡聚糖在pH4下保持穩(wěn)定，但在pH9下，其熒光強度會在35℃、1個月內(nèi)出現(xiàn)相當(dāng)大的下降（24％）。數(shù)項研究³均證實了在實驗（1-6天）期間FITC-葡聚糖的體內(nèi)穩(wěn)定性。

FITC-葡聚糖的應(yīng)用

FITC-葡聚糖主要用于細胞和組織中的滲透性和運輸研究，但也可用于其他材料（過濾器、凝膠等）的滲透性研究。其有一點*優(yōu)勢在于通過測量熒光，可以提供健康或患病組織的實時滲透性定量數(shù)據(jù)?；铙w熒光顯微鏡具有高靈敏度，即使組織液中的熒光濃度低至1μg/ ml也可以檢測得到。人們已經(jīng)開發(fā)了數(shù)個模型來方便實時研究^4,5，F(xiàn)ITC-葡聚糖也可用作細胞中的pH探針^6,7。人們在偏振實驗中還發(fā)現(xiàn)，激發(fā)態(tài)的壽命與共軛之前的壽命差不多。

FITC-葡聚糖在以下研究領(lǐng)域都已表現(xiàn)出了自身價值（我們從各個主題的眾多文章中挑選出來的參考文獻）：

1. 腸道組織滲透性研究^8-10
2. 腦和神經(jīng)系統(tǒng)滲透性研究^11-13
3. 腫瘤組織滲透性研究^14-16
4. 眼內(nèi)滲透性研究^17-19
5. 腎組織滲透性研究²⁰

圖3. 注入FITC-葡聚糖150后的頰囊圖像。第二張圖像顯示了注入組胺后微血管出現(xiàn)的滲漏。 （已獲得E.Svensjö許可）。

供應(yīng)商：西安凱新生物科技有限公司

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產(chǎn)品二：FITC-DEAE-葡聚糖（FDD）

化學(xué)名：

FITC二乙基氨基乙基葡聚糖

熒光素-硫代氨基甲?；?(O-2-二乙基氨基乙基)-葡聚糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

FITC-DEAE-葡聚糖以易溶于水或電解質(zhì)溶液的黃色粉末形式供應(yīng)。其溶解速率取決于顆粒大小和結(jié)構(gòu)，我們建議您在劇烈攪拌下緩慢加入粉末 – 如果產(chǎn)品分子量比較高，可以加熱水。 DS（FITC）在0.001-0.008之間，氮含量的范圍是3-5％ - 相當(dāng)于每三個葡萄糖單位上約有一個DEAE取代基。我們通過合成在葡聚糖鏈中引入兩種類型的DEAE-取代基（參見上面的結(jié)構(gòu)圖）。主要取代基是單一的叔胺基團，但其在高DS下會進一步發(fā)生反應(yīng)，生成含有季胺以及叔胺的“串聯(lián)”基團。

光譜數(shù)據(jù)

圖4. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-DEAE-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：495nm；發(fā)射波長：520 nm。

儲存和穩(wěn)定性

將粉末遮光、儲存在密封良好的容器中，可以在室溫下穩(wěn)定保存三年以上。FITC-DEAE-葡聚糖不應(yīng)在pH> 8的溶液條件下長期保存。

FITC-DEAE-葡聚糖的應(yīng)用

FITC-DEAE-葡聚糖具有母體DEAE-葡聚糖的眾多特性，同時還具有熒光性以及可追蹤性。 DEAE-葡聚糖的部分應(yīng)用如下：

• 作為疫苗的佐劑
• 增強細胞對蛋白質(zhì)和核酸的攝入量 - 轉(zhuǎn)染技術(shù)和病毒感染性
• 穩(wěn)定蛋白質(zhì)（酶）

在利用穿孔素來研究有核細胞攝入帶正電的分子的實驗中，人們已經(jīng)用到了FITC-DEAE-葡聚糖²¹。在吸收促進劑的某項研究中，人們比較了FITC-DEAE-葡聚糖、FITC-葡聚糖和FITC-葡聚糖硫酸鹽通過鼻粘膜的滲透性²²。

產(chǎn)品三：FITC-羧甲基 - 葡聚糖（FCM-葡聚糖）

化學(xué)稱：

FITC羧甲基葡聚糖
熒光素-硫代氨基甲?；?(O-羧甲基)-葡聚糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

FITC-CM-葡聚糖是通過特選葡聚糖部分與活化羧甲基衍生物在堿中發(fā)生反應(yīng)而制得的，該過程在葡聚糖鏈上引入了O-羧甲基。羧基含量約為5％，相當(dāng)于每5個葡萄糖單位上約有1個CM基團。此后，通過與異硫氰酸熒光素反應(yīng)引入熒光素基團。 DS（FITC）介于0.003 - 0.008之間。 FITC-CM-葡聚糖以易溶于水或電解質(zhì)溶液的黃色粉末形式供應(yīng)。由于分子上帶有負電荷羧基，產(chǎn)物具有明顯的聚陰離子特征。FITC-CM-葡聚糖的溶液性質(zhì)估計與CM-葡聚糖^23-25的溶液性質(zhì)相當(dāng)。在中性溶液中，羧甲基取代基將相互排斥，導(dǎo)致葡聚糖線團型（coil）鏈段伸展。 FITC-CM-葡聚糖不溶于大多數(shù)有機溶劑，例如乙醇、甲醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、乙酸乙酯。

光譜數(shù)據(jù)

圖5. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-CM-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：493nm；發(fā)射波長：519 nm。

儲存和穩(wěn)定性

相關(guān)的前瞻性穩(wěn)定性研究已經(jīng)證實：CM-葡聚糖的效力和純度可以保存至少3年（該研究尚未發(fā)表），根據(jù)我們使用FITC-葡聚糖的經(jīng)驗，我們預(yù)測FITC-CM-葡聚糖具有類似的穩(wěn)定性。我們建議將FITC-CM-葡聚糖儲存在室溫、黑暗、密封容器中。

FITC羧甲基葡聚糖應(yīng)用

CM-葡聚糖本身既具有生物相容性，被用作數(shù)種制藥和診斷應(yīng)用中的原材料。同樣，F(xiàn)ITC-CM-葡聚糖的毒性應(yīng)該也很低。在葡聚糖鏈中插入羧基可以為將令人感興趣的生物活性分子（藥物、酶、診斷示蹤劑）固定在葡聚糖上提供了進一步的機會。羧基部分可用于眾多反應(yīng)，例如酯化，以及與胺、UGI或Passerini反應(yīng)。簡單的離子結(jié)合反應(yīng)也可以提供一系列結(jié)合了不同陽離子分子的衍生物^26,27。羧基還會使得分子整體帶上負電荷，對于獲取細胞膜和組織的滲透性信息可能比較有價值²⁹。FITC-CM-葡聚糖在藥物遞送系統(tǒng)研究中的應(yīng)用已有相關(guān)報道²⁹。

產(chǎn)品四：FITC-聚蔗糖（FITC-Ficoll^®）

化學(xué)名：

聚蔗糖(3´,6´二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
熒光素異硫氰酸酯 - 聚蔗糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

采用類似于de Belder和Granath¹所述的方法，用熒光素對聚蔗糖組分進行標記。通過穩(wěn)定的硫代氨基甲酰基鍵連接基團與熒光素部分進行連接，標記步驟不會導(dǎo)致聚蔗糖發(fā)生任何降解。 FITC-polysucroses的DS在0.001-0.008之間，在該低水平范圍內(nèi)，反應(yīng)對聚蔗糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。

FITC-聚蔗糖以黃色粉末形式供應(yīng)，其在水或鹽溶液中可以自由溶解，得到黃色溶液。該產(chǎn)品也溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺。

聚蔗糖分子在溶液中顯示為球形分子，和結(jié)構(gòu)預(yù)期結(jié)果一樣。在表2（下表）中，我們比較了葡聚糖和聚蔗糖組分的Stokes半徑，該數(shù)據(jù)反映了分子靈活性之間的差異。該分子可視作介于堅硬的固體圓球和柔性線團型鏈端之間的中間體。因此，在比較具有相似分子量的聚蔗糖和葡聚糖組分時，聚蔗糖的分子尺寸會小一些。與具有相同濃度的蔗糖溶液相比，聚蔗糖溶液具有非常低的滲透壓。例如，10％的聚蔗糖70溶液的滲透壓為3mOs / kg，而10％蔗糖的滲透壓為150。

目前還沒有任何關(guān)于FITC-聚蔗糖詳細毒性研究的報道。然而，在對實驗動物靜脈內(nèi)施用12g / kg的聚蔗糖組分（100000-500000）后，未表現(xiàn)出任何毒性癥狀。聚蔗糖與細胞、病毒、微生物等之間具有良好的生物相容性，在細胞分離技術(shù)中已經(jīng)應(yīng)用了數(shù)十年。

表2. 聚蔗糖和葡聚糖的分子尺寸比較

光譜數(shù)據(jù)

圖6. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（9.9mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：496nm；發(fā)射波長：525 nm。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

儲存和穩(wěn)定性

在室溫、氣密容器中，F(xiàn)ITC-聚蔗糖粉至少可以穩(wěn)定儲存6年。關(guān)于FITC-聚葡萄糖在溶液中的穩(wěn)定性尚未有任何詳細研究報道。然而，熒光素部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲酰基連接基團的穩(wěn)定性類似于葡聚糖上連接基團（參見FITC-葡聚糖）的穩(wěn)定性。 FITC-葡聚糖在高35℃的溫度、pH 4下可以保持穩(wěn)定長達1個月，但由于蔗糖中糖苷鍵具有不穩(wěn)定性，所以不推薦將該方案用于聚蔗糖基產(chǎn)品。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌。

FITC-聚蔗糖的應(yīng)用：

關(guān)于兩種多糖（聚蔗糖（Ficoll^®）和葡聚糖）在評估腎小球選擇性中與腎小球蛋白對比的可用數(shù)據(jù)已有綜述發(fā)表³⁰。多分散多糖是測量腎小球選擇滲透性的優(yōu)良探針，其具有可重現(xiàn)性、可靠性和性。作者闡述了可能會對結(jié)果產(chǎn)生影響的各種特性，如分子大小、形狀、電荷和靈活性，并評估它們在各種孔隙模型中的結(jié)果。靜脈輸注Ficoll腎小球滲透性的研究表明，其滲透性下限值在50Å左右，而葡聚糖預(yù)計值在60-70 Å，這一點可以由葡聚糖靈活性更大來解釋。人們還通過研究FITC-聚蔗糖在缺乏內(nèi)皮細胞膜的小鼠中的清除率來闡明大分子運輸途徑³¹。還使用FITC-聚蔗糖70和400（即FITC-菊糖）³²來在不同的腎小球濾過率下研究腎小球濾過作用。

對葡聚糖和Ficoll腎小球濾過作用的研究顯示，相比于葡聚糖，腎小球膜對Ficoll表現(xiàn)出更多的限制性屏障作用³³。有趣的是，F(xiàn)icoll篩分系數(shù)的值接近于不帶電球狀蛋白質(zhì)的報道值。用FITC-聚蔗糖70/400監(jiān)測手術(shù)和肌肉創(chuàng)傷后大鼠的腎小球篩分系數(shù)³⁴。用FITC-聚蔗糖400（960μg）、FITC-聚蔗糖70（40μg）和FITC-菊糖（500μg）混合物作為初次推注給藥給大鼠。使用FITC-聚蔗糖70/400在小窩蛋白-1敲除小鼠中研究腎小球滲透性³⁵。

通過對大鼠輸注FITC-聚蔗糖70和白蛋白來觀察溫度和氯化銨對清除率的影響。聚蔗糖的表現(xiàn)與葡聚糖不同，在20-70 Å范圍內(nèi)較低^36,37。使用FITC-聚蔗糖70來評價糖尿病9周后天然白蛋白清除率的增加是由于電荷選擇性降低還是大孔徑比例的變化而導(dǎo)致的³⁸。

產(chǎn)品五：FITC-DEAE-聚蔗糖

化學(xué)名：

Fluoresceinyl-thiocarbamoyl-(O-diethylaminoethyl)-polysucrose
熒光素基-硫代氨基甲?；?(O-二乙基氨基乙基)-聚蔗糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

FITC-DEAE-聚蔗糖以易溶于水或緩沖溶液的黃色粉末形式供應(yīng)，大約每五個己糖基團上有一個DEAE基團。 FITC取代度在0.001至0.008之間。該產(chǎn)品具有聚陽離子特性。如以上結(jié)構(gòu)表示中所描繪的一樣，DEAE-取代基可以作為單個單元或作為“串聯(lián)”單元存在，后者含有季銨結(jié)構(gòu)。

光譜數(shù)據(jù)

激發(fā)在493nm下進行，而熒光測量在523nm處進行（見圖7）。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

圖7. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-DEAE-聚蔗糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：496nm；發(fā)射波長：530 nm。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

儲存和穩(wěn)定性

FITC-DEAE-聚蔗糖以黃色干燥粉末形式供應(yīng)，儲存在黑暗、室溫、密封良好的容器中。交貨時產(chǎn)品的pH值為6.5 - 7.0，不應(yīng)低于5，產(chǎn)品不得長期存放在pH> 7.0的條件下。

FITC-DEAE-聚蔗糖應(yīng)用

該產(chǎn)品可以用于研究聚陽離子聚合物的滲透性，并與器官、組織和細胞中的中性聚合物進行比較。

產(chǎn)品六:FITC-CM-聚蔗糖（FITC-CM-Ficoll^®）

化學(xué)名：

FITC-(O-羧甲基)-聚蔗糖
熒光素基-硫代氨基甲?；?(O-羧甲基)-聚蔗糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

光譜數(shù)據(jù)無

激發(fā)在495nm下進行，而熒光測量在517nm處進行（見圖8）。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。查看

圖8. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（11mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-CM-聚蔗糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：495nm；發(fā)射波長：517 nm。

儲存和穩(wěn)定性

FITC-CM-聚蔗糖以干燥黃色粉末形式供應(yīng)，應(yīng)在黑暗、室溫下密封保存。溶液可以保存在室溫下，在pH6-7、黑暗、冰箱這一優(yōu)選環(huán)境中可以保存數(shù)周。

FITC-CM-聚蔗糖的應(yīng)用

FITC-CM-聚蔗糖在闡明腎小球膜的性質(zhì)方面發(fā)揮了重要作用，盡管膜上帶負電荷，但陰離子Ficoll衍生物的選擇滲透性還是要大于中性物質(zhì)²⁸。但是，后續(xù)使用FITC-CM-polysucrose所進行的研究反駁了這一發(fā)現(xiàn)³⁹。對溶質(zhì)電荷在腎小球膜篩分特性中的重要作用重新進行了研究⁴⁰。

產(chǎn)品七：FITC-菊糖

化學(xué)名：

菊糖(3’,6’二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
熒光素異硫氰酸酯-菊糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

對從大麗花塊莖中提取的菊糖組分用類似于de Belder和Granath所述的方法用熒光素進行標記⁴⁰。熒光素部分通過穩(wěn)定的硫代氨基甲酰基鍵連接基團進行連接，標記步驟不會導(dǎo)致菊糖發(fā)生任何降解。 FITC-菊糖的DS在0.001-0.008之間，在該低水平范圍內(nèi)，反應(yīng)對菊糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。

FITC-菊糖以黃色粉末形式供應(yīng)，可以溶于水或鹽溶液，得到黃色溶液。稀釋溶液（1-2％）在靜置時保持透明，但更濃（> 10％）的溶液在靜置時會形成沉淀，這是因為菊糖傾向于形成結(jié)晶聚集體。這些沉淀物將在加熱時可以重新溶解。溶液在中性pH左右時可以接受高達80℃的溫度。該產(chǎn)品也溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯。

通過SEC測定的FITC-菊糖的Mw（Superose 6 + 12；葡聚糖校準）為 5000。Phelps ⁴⁰根據(jù)滲透壓數(shù)據(jù)測定的菊糖組分Mw為5640。

光譜數(shù)據(jù)

激發(fā)在490nm下進行，而熒光測量在520nm處進行（見圖9）。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。熒光對pH的依賴關(guān)系如圖10所示。

圖9. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-菊糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：492nm；發(fā)射波長：519 nm。

圖10 FITC-菊糖在pH 4-9范圍內(nèi)的熒光光譜；發(fā)射波長：519 nm。

儲存和穩(wěn)定性

熒光素部分和菊糖之間的硫代氨基甲?；B接基團的穩(wěn)定性和葡聚糖類似（關(guān)于FITC-葡聚糖穩(wěn)定性的信息請參見數(shù)據(jù)文件）。目前尚未有任何關(guān)于FITC-菊糖穩(wěn)定性的前瞻性研究，但回顧性研究表明FITC-菊糖粉末在室溫、氣密容器中至少可穩(wěn)定存放6年。 FITC-菊糖溶液不應(yīng)長期儲存在低pH（<5）或高pH（> 9）下，特別是在高溫環(huán)境下。

FITC-菊糖的應(yīng)用

已證明FITC-菊糖是研究實驗動物腎小球濾過率的理想方法，其在過濾和腎通過期間可以保持穩(wěn)定，不會結(jié)合血漿蛋白或透過腎細胞。熒光測量可以提供關(guān)于健康和患病組織的運輸和滲透性的定量數(shù)據(jù)。這些研究可以通過活體熒光顯微鏡實時進行。該技術(shù)具有高靈敏度，可以檢測到組織液中濃度低至1μg/ ml的物質(zhì)。

在大鼠靜脈內(nèi)推注FITC-菊糖⁴¹后，測定大鼠管狀液與血漿濃度比值⁴¹。通過與51Cr-EDTA和[H3] - 菊糖進行比較，確定了該方法作為腎小球濾過作用量度方法的有效性。

Fleck于1999年對FITC-菊糖用于GFR研究進行了*研究⁴²。通過尾靜脈或頸靜脈以每小時4ml / 100g體重的速率給予大鼠4mg / mL。 Dunn及其同事⁴³發(fā)現(xiàn)：小鼠肌酐清除率與FITC-菊粉清除率之間具有良好的相關(guān)性。其他研究中也使用FITC-菊糖測定了腎小球濾過作用^44,45。

FITC-菊糖已被用于研究腸上皮細胞的滲透性^46,47。

產(chǎn)品八：熒光素透明質(zhì)酸（FHA-Se）

化學(xué)名：

5-氨基熒光素標記的透明質(zhì)酸鹽
5-氨基熒光素標記的透明質(zhì)酸

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

自馬鏈球菌中提取的透明質(zhì)酸是一種由β（1-3）葡糖苷酸和β（1-4）氨基葡萄糖苷單元交替組成的多糖，對其用5-氨基-熒光素進行標記，得到黃色纖維狀產(chǎn)品，其可以溶于水和電解質(zhì)，不過，固體需要經(jīng)過長時間的溫和攪拌才能溶解（過夜）⁴⁸。 取代度在0.001到0.008之間。 用GPC系統(tǒng)測定的分子量（用葡聚糖標準樣校準）Mw為6.0×10⁶。

光譜數(shù)據(jù)

圖11. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（12mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-透明質(zhì)酸的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：495nm；發(fā)射波長：524 nm。

儲存和穩(wěn)定性

干燥產(chǎn)品應(yīng)儲存在黑暗、室溫、密封容器中。 建議保質(zhì)期為5年。 產(chǎn)品溶液在37℃，pH7.5下培養(yǎng)1個月后，熒光素組分釋放不可見⁴⁸。

5-氨基熒光素標記的透明質(zhì)酸應(yīng)用

在過去幾年中，透明質(zhì)酸的許多應(yīng)用都出現(xiàn)在醫(yī)學(xué)（特別是其對眼科手術(shù)做出了*的貢獻）和化妝品中。 熒光素標記的透明質(zhì)酸可以用作體外跟蹤透明質(zhì)酸生命周期的探針。 FITC標記的透明質(zhì)酸制劑極大地增強了基底透過皮膚的可視性⁴⁹。 熒光素標記的透明質(zhì)酸的其他應(yīng)用也已見諸報端^50-53。

產(chǎn)品九： TRITC標記多糖

TRITC葡聚糖

化學(xué)名：

四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 葡聚糖
葡聚糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
四甲基羅丹明B硫代氨基甲?；?- 葡聚糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

通過與四甲基羅丹明B異硫氰酸酯（混合異構(gòu)體）偶聯(lián)，利用特選葡聚糖組分制備得到了TRITC-葡聚糖。 DS（TRITC）的范圍從0.001到0.008。 在這一低取代度范圍下，羅丹明部分叔氨基的電荷貢獻可以忽略不計。審查了所有批次的分子量、干燥失重和游離TRITC。

光譜數(shù)據(jù)

激發(fā)在550nm下進行，而熒光測量在572nm處進行（見圖12）。我們實驗室的研究表明：TRITC-葡聚糖溶液的熒光在pH 3-9的范圍內(nèi)只有輕微的變化（見圖13）。這在進行定量測量時很有意義。在生物介質(zhì)中進行測量可能會顯著影響熒光強度，其有可能會增強，也有可能會減弱。

圖12. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TRITC-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：550nm；發(fā)射波長：572 nm。

圖13 TRITC-葡聚糖的熒光強度（em.572nm）與pH的關(guān)系。

儲存和穩(wěn)定性

TRITC-葡聚糖的穩(wěn)定性尚未有任何詳細研究，但據(jù)推測其與FITC-葡聚糖應(yīng)較為相似，因為兩種物質(zhì)的取代基均通過硫代氨基甲?；鶈卧M行連接。只有在高pH（> 9）和高溫下，硫代氨基甲?；I才存在水解的風(fēng)險（參見FITC-葡聚糖）。 TRITC-葡聚糖溶液（pH 6-7）可以在室溫、黑暗中儲存數(shù)周。儲存在密封容器、黑暗中的干燥粉末保質(zhì)期為5年。

TRITC-葡聚糖的應(yīng)用

TRITC-葡聚糖主要用于細胞、血管和組織中的滲透性和運輸研究。熒光的測量可以通過活體熒光顯微鏡定量和實時進行。該技術(shù)具有高靈敏度，可以檢測到組織液中濃度低至1μg/ ml的物質(zhì)。另一個重要的特性是TRITC-葡聚糖不會結(jié)合在動脈壁上^54,55。

人們已證明倉鼠頰囊的微血管是由各種炎癥條件所引起的血漿滲漏的有用研究模型。使用合適的過濾器（490 / 520nm），可以通過活體熒光顯微鏡檢查臉頰囊，并用數(shù)碼相機拍攝圖像（參見圖14）。靜脈內(nèi)給予5％TRITC-葡聚糖150生理鹽水溶液（約100mg / kg體重）^56-58。。有關(guān)該技術(shù)的更多信息，請參閱Thorball³。 TRITC-葡聚糖已被廣泛應(yīng)用于組織和細胞的滲透性研究，我們只隨機選擇了少部分參考文獻供您使用^59-65。

圖14. 在組胺攻擊15分鐘后，將TRITC-葡聚糖150注射到倉鼠臉頰處。 （已獲得E.Svensjö許可）

產(chǎn)品十：TRITC-聚蔗糖（TRITC-Ficoll^®）

化學(xué)名：

四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 聚蔗糖
聚蔗糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
四甲基-羅丹明B硫代氨基甲?；?聚蔗糖

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

 特性

TRITC-聚蔗糖是一種聚蔗糖衍生物，其是通過蔗糖與表氯醇交聯(lián)合成的聚合物。 TRITC-聚蔗糖通過聚蔗糖與TRITC反應(yīng)制備而成，反應(yīng)條件與TRITC-葡聚糖的條件相似。 TRITC-聚蔗糖可以在很寬的pH范圍內(nèi)易溶于水和鹽溶液。 聚蔗糖比葡聚糖對酸更敏感，因此在酸性pH范圍下工作時還請務(wù)必小心。其以易溶于水的紅色粉末形式供應(yīng)。

光譜數(shù)據(jù)

圖15. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（11mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TRITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：522nm；發(fā)射波長：552 nm。

儲存和穩(wěn)定性

在室溫、氣密容器中，TRITC-聚蔗糖粉至少可以穩(wěn)定儲存6年。關(guān)于TRITC-聚蔗糖在溶液中的穩(wěn)定性尚未有任何詳細研究報道。然而，四甲基若丹明部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲?；B接基團的穩(wěn)定性類似于葡聚糖上連接基團（參見TRITC-葡聚糖）的穩(wěn)定性。但由于蔗糖中糖苷鍵的不穩(wěn)定性，所以不建議將聚蔗糖基產(chǎn)品儲存在低pH環(huán)境下。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌。

TRITC-聚蔗糖的應(yīng)用

TRITC-聚蔗糖與FITC-聚蔗糖的應(yīng)用基本相似，但其還具有某些優(yōu)點。如前所述，與FITC標記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小。另外，更長的發(fā)射波長還能避免實驗環(huán)境中的背景干擾。

TRITC-聚蔗糖 70已用于腎內(nèi)皮屏障研究^66,67。TRITC-Ficolls也已用于了胸腺非依賴性抗原的抗體應(yīng)答研究⁶⁸。

 產(chǎn)品十一：四甲基羅丹明透明質(zhì)酸（TR-HA）

化學(xué)名：

四甲基羅丹明透明質(zhì)酸
透明質(zhì)素,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)
四甲基羅丹明B透明質(zhì)酸

CAS號：無

結(jié)構(gòu)

特性

自馬鏈球菌中提取的透明質(zhì)酸是一種由β（1-3）葡糖苷酸和β（1-4）氨基葡萄糖苷單元交替組成的多糖，對其用氨基-四甲基羅丹明進行標記，得到可溶于水和電解質(zhì)的紅色產(chǎn)品。 DS在0.001到0.008之間。 用GPC系統(tǒng)測定的分子量（用葡聚糖標準樣校準）Mw為6.0×10⁶。

光譜數(shù)據(jù)

圖16. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（12mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，TR-HA的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：552nm；發(fā)射波長：576 nm。

四甲基羅丹明透明質(zhì)酸應(yīng)用：

四甲基羅丹明透明質(zhì)酸（TR-HA）與熒光素透明質(zhì)酸（見前面部分）的應(yīng)用基本相似，但其還具有某些優(yōu)點。如前所述，與FITC標記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小。另外，更長的發(fā)射波長還能避免實驗環(huán)境中的背景干擾。TR-HA和雙光子成像已用于腦組織的侵入性生長研究中⁶⁹。

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