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MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性操作步驟（背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)為例）

2023-7-24　閱讀(147)

無菌條件下取新生一天的SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)。
鏡下去除神經(jīng)根和外膜，放入1ml 0.1%膠原酶中37℃消化30min，每5min搖勻一次。
洗去膠原酶，吹打分散后，接種于預(yù)先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中，每孔含100μl無血清L15培養(yǎng)基，細(xì)胞約800個(gè)。
實(shí)驗(yàn)組分別加入純化的表達(dá)蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對(duì)照加入等體積表達(dá)蛋白的溶劑。
37℃ 5%CO2培養(yǎng)48hr后，每孔加入10μl MTT，37℃ 5%CO2孵育4hr。
加入100μl 20%的SDS處理液，37℃孵育20hr。
用EL×800微孔酶標(biāo)儀測(cè)定OD570值，數(shù)據(jù)分析。




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