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上海吉至生化科技有限公司
主營產品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
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2023-7-21 閱讀(588)
實驗材料:
枯草芽孢桿菌， 種子培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)基，恒溫搖床，無菌吸管，試管，三角瓶，發(fā)酵罐。
實驗方法:
工藝流程:
試管斜面菌種（12 h，37℃）→接種(1環(huán)菌苔)→搖瓶種子培養(yǎng)液中，250 mL三角瓶振蕩培養(yǎng)（12 h，37℃）→種子培養(yǎng)液，接種（1%－5%）→機械攪拌發(fā)酵罐發(fā)酵。
發(fā)酵罐種子液的制備:
搖瓶種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20 g，牛肉膏1 g，蛋白胨5 g， NaCl 5 g，H2 O 1 000 ml，pH自然 ，高壓滅菌鍋121℃滅菌20 min。
搖瓶種子培養(yǎng)基分裝于250ml三角瓶，每瓶50ml。從斜面上挑取一環(huán)菌種，接入搖瓶種子培養(yǎng)基，37℃，150rpm振蕩培養(yǎng)12小時即為種子液。
發(fā)酵培養(yǎng)基制備:
發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖20 g，淀粉20 g，酵母膏1 g，蛋白胨5 g， NaNO3 3 g，KH2PO4 5 g， CaCO3 10 g，H2O 1 000 ml；pH7.0。
淀粉糊化：淀粉：水＝1：4加入預熱至60℃水中，邊加邊攪拌，煮沸10分鐘成糊狀（煮沸過程中不斷攪拌）。
發(fā)酵：
①空消：空罐滅菌。
②實消：將發(fā)酵培養(yǎng)基5L從進樣口倒入15 L發(fā)酵罐中，蓋上蓋子。檢查發(fā)酵罐安裝完好后， 105℃滅菌15分鐘。
③接種：可以采用火焰接種法，在接種口放置酒精圈，點燃后，將菌種通過火焰圈迅速倒入發(fā)酵罐內，進行計時培養(yǎng)。
④發(fā)酵：種子培養(yǎng)好后，將種子接到發(fā)酵罐中，接種量1-5%，36°C—37°C 控溫通風培養(yǎng)，攪拌轉速200轉/分，0～1 h，通風比l：0.5～0.8；35 hr以后調速380轉/分；24～28小時，通風1：1.0。每6小時測定活力一次，外觀糖一次；每2小時測pH一次，記錄通風量，轉速、溫度等。發(fā)酵過程監(jiān)測時，注意觀察發(fā)酵罐的結構，測定結果記錄于表，測定時同時鏡檢。定期測定菌濃，當菌濃達到最高時結束發(fā)酵。
⑤取樣：自培養(yǎng)操作開始起，每6h取1次樣。取樣前后，要用蒸汽沖取樣口。
