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進(jìn)口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響?

閱讀:552        發(fā)布時(shí)間:2019/7/28
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   進(jìn)口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響?
  進(jìn)口電泳儀又稱(chēng)毛細(xì)管電泳,是一種新型液相分離分析技術(shù),以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)產(chǎn)生的電滲流為驅(qū)動(dòng)力,根據(jù)試樣中各組分之間電泳淌度和分配行為的差異實(shí)現(xiàn)分離。
  進(jìn)口電泳儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室哪些因素會(huì)影響電泳遷移率呢?
  DNA分子大小遷移速率與logN成反比(N為堿基對(duì)數(shù)目)。分子越大,摩擦阻力越大,同時(shí)大分子通過(guò)凝膠孔徑的效率也低于較小的分子,所以分子大的遷移慢。等量的空間結(jié)構(gòu),緊密的電泳快(超螺旋>線(xiàn)性DNA)一般來(lái)說(shuō),分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快。
  濃度越大,分子孔徑就越小,DNA遷移速率就越低,反之,遷移速率就大。另外,濃度也跟凝膠的分辨率有關(guān),濃度越大,分辨率越高,但分離的DNA片段就越小。
  一般遷移速率超螺旋環(huán)狀>線(xiàn)狀DNA>單鏈開(kāi)環(huán)。低電壓時(shí),線(xiàn)狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。包括標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖和低熔點(diǎn)瓊脂糖以及正在研制的介于二者之間的瓊脂糖。其分辨率等各有不同。
  溶液pH值距離其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn),其所帶凈電荷量就越大,電泳的速度也就越大,尤其對(duì)于蛋白質(zhì)等兩性分子,緩沖液pH還會(huì)影響到其電泳方向;溶液的離子強(qiáng)度過(guò)低,會(huì)使電導(dǎo)率降低,DNA不是全然不動(dòng)就是遷移極慢;而離子過(guò)強(qiáng)時(shí),電導(dǎo)率上升,會(huì)產(chǎn)生大量熱能,使凝膠變化甚至熔化,也會(huì)使DNA變性。
  染色劑溴化乙錠插入雙鏈DNA造成其負(fù)電荷減少、剛性和長(zhǎng)度增加,因此,線(xiàn)性DNA-染料復(fù)合物在凝膠中的遷移率降低。
  研究結(jié)果表明:
  在低濃度、低電壓下,分離效果較好。在低電壓條件下,線(xiàn)性DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。但是,在電場(chǎng)強(qiáng)度增加時(shí),較大的DNA片段遷移率的增加相對(duì)較小。因此隨著電壓的增高,電泳分辨率反而下降,為了獲得電泳分離DNA片段的大分辨率,電場(chǎng)強(qiáng)度不宜高于15V/cm。一般在5-10v之間。電泳系統(tǒng)的溫度對(duì)于DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳行為沒(méi)有顯著的影響。通常在室溫下進(jìn)行電泳,只有當(dāng)凝膠濃度低于0.5%時(shí),為增加凝膠硬度,可在4℃,進(jìn)行電泳。

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