試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用利裂解液配方，有針對(duì)性的從組織、培養(yǎng)細(xì)胞、拭子、血液、尿液、唾液、環(huán)境樣本中獲得病毒 RNA。裂解、提取和純化只需 10 分鐘。該配方中添加 RNA 保護(hù)劑，能夠抑制 RNA降解、保護(hù)RNA 完整，從而提高 RNA 產(chǎn)量。提取后的 RNA 可直接用于 RT-PCR、RT-PCR、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mL 無 DNase 無 RNase 離心管

使用方法

1.樣本處理方法

1.1 從動(dòng)物組織中提取

1.1.1 取 20-100mg 組織樣本放入液氮中充分研磨，加入 700uL 裂解液 VR，顛倒混勻?；蛘呷?/span> 20-100mg 組織樣本加入 700uL 裂解液 VR，加入1顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨 1-2分鐘。

1.1.2  55℃孵育 1 分鐘。12,000rpm 離心 1 分鐘。

1.1.3  取 500uL 上清加入 250uL 無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 進(jìn)行操作

12從中取

1.2.1 懸浮細(xì)胞 1.000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀?；蛘哔N壁細(xì)胞用胰酶消化后 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5x106個(gè)時(shí)，加入 500uL 裂解液 VR。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí)，加入 700uL裂解液 VR。輕輕吹打混勻，55C孵育 1 分鐘。

1.2.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5x106個(gè)時(shí)，取 450uL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí)，取 650uL 上清。

1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.3 從血液、尿液、唾液、細(xì)胞上清液中提取1.3.1 300uL 樣本中加入 500uL 解液 VR。顛倒混勻，55C孵育 1分鐘1.3.2 加入 400uL 無水乙醇，上下顛倒混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.4從子中提取

1.4.1 拭子置于 700uL 裂解液 VR 中，顛倒混勻，55°C孵育 1 分鐘。1.4.2 加入 350uL 無水乙醇，上下顛倒混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作

2.RNA 提取

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中(如有需要可離心兩次)，12,000rpm 離心 1分鐘，倒掉收集管中廢液2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500uL 洗滌液 VRI，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。2.3 向RNA 吸附柱中加入 500uL 洗滌液 VRII，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液

2.4 重復(fù)步驟 2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將RNA 吸附柱放入新 1.5mL無DNase 無RNase 離心管中加入 30-50uL 洗脫液 V，室溫放置1分鐘。2.7 12,000rpm 離心2 分鐘，得到 RNA 溶液，-80C保存。

注意事項(xiàng)

1、務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止 RNA 降解。

2、盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行 RNA 提取。

3、使用無 DNase 無RNase 的吸頭和離心管，防止 RNA 降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4、為了提高洗脫效率，可提將洗脫液 V 置于 65°C水浴后再使用。