常見問題解惑---慢病毒

一、慢病毒是什么？

慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性：整合入宿主細胞基因組，長期表達，可用于轉(zhuǎn)基因動物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性：比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細胞，更重要的，還能感染非分裂期的細胞。

吉凱提供的慢病毒為“zx"性病毒，即病毒感染目的細胞后不會再感染其他細胞，也不會利用宿主細胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。但該病毒仍然具有可能的潛在的生物學(xué)危險

二、慢病毒如何稀釋？

慢病毒使用時，先將病毒從-80℃冰箱取出，冰浴融化，可使用D-hanks，PBS，生理鹽水或培養(yǎng)基進行稀釋。

三、慢病毒生物安全性如何？

重組慢病毒的生物安全等級被確定為II級，需要在生物安全級II級的條件下進行慢病毒操作實驗。

四、慢病毒如何保存？慢病毒的滴度單位是什么？

慢病毒長期保存則需放置于-80℃或更低溫度的環(huán)境中。在-80℃環(huán)境中慢病毒可以穩(wěn)定存放6個月以上。盡可能避免反復(fù)凍融，否則會降低病毒滴度。亞載提供的慢病毒的滴度單位是TU/ml (transduction units/ml) ，即每毫升中含有具有生物活性的慢病毒顆粒數(shù)。如：慢病毒滴度為 1E+8 TU/ml，即每毫升病毒液中含有1E+8個具有生物活性的慢病毒顆粒。

五、慢病毒使用安全注意事項有哪些？

1.病毒操作時建議使用生物安全柜。 如果使用普通超凈工作臺操作病毒，請不要打開排風(fēng)機；

2.病毒操作時請穿實驗服，帶口罩和手套；操作病毒時特別小心不要產(chǎn)生氣霧或飛濺。如果操作時超凈工作臺有毒污染，請立即用1%的SDS溶液擦拭干凈；

3.如需要離心，應(yīng)使用密封性好的離心管，或者用parafilm膜封口后離心，而且盡量使用組織或細胞培養(yǎng)室內(nèi)的離心機；

4.用顯微鏡觀察細胞感染情況時應(yīng)遵從以下步驟：擰緊培養(yǎng)瓶或蓋緊培養(yǎng)板，用70%乙醇清理培養(yǎng)瓶外壁后拍照，離開顯微鏡實驗臺之前，用70%乙醇清理顯微鏡載物臺；

5.廢棄的含過病毒的培養(yǎng)基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養(yǎng)板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時或常規(guī)濕熱滅菌（121℃，20 min）；

6.實驗結(jié)束后，用肥皂和水清洗雙手。