CCK-8法檢測(cè)不同濃度化合物對(duì)細(xì)胞增殖活性影響

實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

表格一：實(shí)驗(yàn)儀器

表格二：試劑

一、         實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)、配制成濃度為5×10⁴個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入100μL 細(xì)胞懸液（每孔5×10³個(gè)細(xì)胞）；

2、  將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜；

3、  使用*培養(yǎng)液（90%培養(yǎng)液+10%胎牛血清）分別配置含不同濃度化合物的工作液，混合均勻；

4、  每孔加入100μL相應(yīng)工作液，每種濃度設(shè)置3重復(fù)；

5、  細(xì)胞在37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后棄上清液，新鮮培養(yǎng)液洗滌每孔細(xì)胞1次；

6、  將96孔板進(jìn)行CCK-8染色，λ=450nm，測(cè)定OD值：

1)     每孔加入100μL CCK-8工作液（V_{培養(yǎng)液}： V _CCK-8原液 =10：1），在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)；

2)     λ=450nm，酶標(biāo)儀讀出每孔的OD 值，計(jì)算細(xì)胞增值率。

7、  計(jì)算各組細(xì)胞增值率