A549/DDP人肺腺癌耐株介紹：

種屬：人；貼壁生長(zhǎng)；生長(zhǎng)周期：3~4天

培養(yǎng)基：培養(yǎng)條件

F12K培養(yǎng)基(添加NaHCO3 2.5g/L, DDP 1.0mg/L),90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

氣相：空氣,95%；二氧化碳,5%

溫度：37攝氏度

細(xì)胞描述：

細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞數(shù)量：1×106個(gè)

細(xì)胞傳代：1：3~1：8傳代；2~3天換液1次

細(xì)胞特性：A549細(xì)胞通過(guò)DDP間接誘導(dǎo)的方法(DDP起始濃度為1ug/mL，逐級(jí)提高DDP濃度，直至細(xì)胞能在28ug/mL DDP的培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長(zhǎng)

A549/DDP人肺腺癌耐株傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。