破傷風(fēng)抗體（Tetanus Ab）試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人破傷風(fēng)抗體（Tetanus Ab）的含量。

l有效期：6個月

l保存條件：2-8℃

[實(shí)驗原理]

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人破傷風(fēng)抗體（Tetanus Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人破傷風(fēng)抗體（Tetanus Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

[樣本處理及要求]

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織*碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

[試劑盒組成]

破傷風(fēng)的病原體為破傷風(fēng)梭菌，這是一種厭氧菌，廣泛分布于土壤及環(huán)境、人及動物糞便中。破傷風(fēng)梭菌通過皮膚黏膜破口進(jìn)入人體是致病的發(fā)病原因。

誘發(fā)因素
破傷風(fēng)梭菌在一般淺表的傷口不易生長，其感染的重要條件是局部形成“厭氧微環(huán)境"，以下因素會增加感染破傷風(fēng)梭菌的風(fēng)險：
1.傷口被泥土、糞便、痰液污染；
2.釘子或針造成的穿刺傷；
3.燒燙傷、擠壓傷、炸傷等；
4.開放性骨折；
5.動物或昆蟲咬傷；
6.慢性鼻竇炎、中耳炎、口腔感染、肛旁膿腫等；
7.新生兒臍帶感染；
8.異物殘留在體內(nèi)，如釘子或碎片。

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