Panbio登革熱快速檢測(cè)試劑（膠體金法）說(shuō)明書
Panbio登革熱快速檢測(cè)試劑盒是用來(lái)定性檢測(cè)人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來(lái)鑒別初次和二次感染。它僅能用來(lái)檢測(cè)具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽(yáng)性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學(xué)檢測(cè)抗原或病毒核酸檢測(cè)證實(shí)有登革熱病毒感染。

Panbio登革熱快速檢測(cè)試劑（膠體金法）說(shuō)明書

產(chǎn)品規(guī)格：25T/盒

澳大利亞Panbio公司一直在登革熱（Dengue fever）、羅斯河熱（Ross river fever）的診斷試劑產(chǎn)品方面保持著前沿的市場(chǎng)地位。公司的西尼羅河腦炎（West Nile encephalopalitis）診斷試劑在獲得美國(guó)FDA注冊(cè)。Panbio登革產(chǎn)品擁有廣闊的產(chǎn)品系列，有著廣泛的應(yīng)用。

預(yù)期作用：

Panbio登革熱快速檢測(cè)試劑盒是用來(lái)定性檢測(cè)人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來(lái)鑒別初次和二次感染。它僅能用來(lái)檢測(cè)具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽(yáng)性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學(xué)檢測(cè)抗原或病毒核酸檢測(cè)證實(shí)有登革熱病毒感染。

原理：

在處理病人樣本時(shí)，登革熱特異性IgM和IgG抗體和包埋在橫過(guò)盒膜的兩條線上的抗-人IgM和IgG抗體相結(jié)合。膠態(tài)金復(fù)合物包含重組登革熱1~4型抗原被病人的IgM和IgG捕獲而顯現(xiàn)出粉紅色的線。設(shè)定一個(gè)對(duì)照程序來(lái)指示方法操作正確。

警示

1.所有的人血產(chǎn)品都應(yīng)該按可能有傳染性的材料來(lái)處理。疾病預(yù)防控制中心和國(guó)家健康署建議可能傳染的抗原應(yīng)該在2級(jí)生物安全下進(jìn)行處理。

2.不要用嘴吸取液體，皮膚不要和試劑或病人樣本接觸。

3.嚴(yán)格按照操作規(guī)程才能得到最佳的結(jié)果。試劑必須小心地加以保持實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精確度。

4.超出操作規(guī)程時(shí)間和溫度范圍做試驗(yàn)可能會(huì)導(dǎo)致無(wú)效的結(jié)果。沒(méi)有在即定的時(shí)間和溫度內(nèi)做試驗(yàn)必須要重做。

5.試劑盒內(nèi)的成份是經(jīng)一批單位進(jìn)行質(zhì)量控制的。不同批號(hào)的產(chǎn)品不同混合使用。不要與其它制造商的產(chǎn)品混合。

6.小心使用，避免試劑污染。如果確實(shí)是有微生物污染或有沉淀，就不要使用。配試劑的儀器、容器或是試劑生物污染都可導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7.不要加熱失活的樣本。

8.試劑盒貯存在干燥的地方。

9.不要重復(fù)使用試劑盒。

10.如果箔袋有破損，試劑盒就不要使用。

11.試驗(yàn)材料應(yīng)該按當(dāng)?shù)氐?、州?或國(guó)家法律來(lái)處理。

試劑的貯存方法和期限

1.試劑盒貯存在2~30°C，試劑要穩(wěn)定必須保持恒溫，直至失效。有效期參見包裝袋標(biāo)簽。

2.不要冷凍試劑。

3.在包裝袋上標(biāo)示的有效期內(nèi)試劑都可使用。

4.試劑超過(guò)有效期不能使用。

樣本收集和準(zhǔn)備

1. 靜脈血在室溫下（20~25oC）會(huì)凝結(jié)成塊，然后根據(jù)全國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（NCCLS）（收集診斷靜脈血的認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)程序，H3-A4, 1998）進(jìn)行離心。

血清應(yīng)盡快分離并冷藏（2~8oC）或是冷凍（-20oC），如果在兩天內(nèi)不試驗(yàn)的話，應(yīng)冷凍在更低的溫度下。黃疸血清、有溶血的、脂血的或是有細(xì)菌生長(zhǎng)的血清都不推薦使用

2. 不推薦使用自我解凍的致冷機(jī)來(lái)貯存樣本，因?yàn)樗芤饦颖窘?jīng)過(guò)凍融周期和降低抗體水平，因此產(chǎn)生假結(jié)果。

3.指端血采集后要馬上測(cè)試。NCCLS建議含有EDTA或肝素作為抗凝劑的全血可以不經(jīng)離心就立即使用，或者也可以在2~8 oC放上72小時(shí)（血樣處理加工的認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)程序，H18-A2, 1999）

4.發(fā)熱開始后樣本的采集時(shí)間決定了試驗(yàn)的準(zhǔn)確度。在發(fā)熱開始后的6~14天采得的樣本能得到最佳的結(jié)果。

試劑盒組成

每個(gè)試劑盒包括下面的東西，數(shù)量足夠能完成包裝袋標(biāo)簽上標(biāo)明的測(cè)試份數(shù)。

•25小包。每包里面有一個(gè)試劑盒和一個(gè)10µL的MicroSafe®移液管。

•1份使用說(shuō)明書。

•1管3ml的緩沖液（含有0.1% Proclin）

必要的但不提供的材料

•計(jì)時(shí)器

一般程序

MicroSafe®移液管的操作方法

MicroSafe®移液管能用來(lái)吸全血、血漿或血清。

在吸液時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格遵照下面的使用說(shuō)明（圖1）：

1.水平地拿著移液管。

2.吸液時(shí)，移液管的尖duan和測(cè)試樣本接觸（見下圖1）。

3.輕輕地?cái)D泡排出樣本。

測(cè)試程序：

注意：在開始實(shí)驗(yàn)前確保所有的試劑平衡至室溫（20-25°C）。

要用時(shí)，才從袋內(nèi)拿出試劑盒和MicroSafe®移液管。

. 用微量移液器或是提供的MicroSafe®移液管在圓孔內(nèi)加入10µL的全血、血清或血漿。

. 讓樣品wanquan吸收融入圓孔里的樣品墊內(nèi)。

. 在方孔上方1cm處垂直地拿著緩沖瓶。

. 在試劑盒底部的方孔內(nèi)加入2滴緩沖液。

加緩沖液的剛剛15分鐘后讀結(jié)果。

. 在測(cè)試區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)粉紅色線的痕跡就表明陽(yáng)性結(jié)果。

. 超過(guò)15分鐘后讀取的結(jié)果將認(rèn)為是無(wú)效的，必須要重做。

錯(cuò)誤的使用用法

1.加液時(shí)，瓶子不能水平。

2.加液時(shí)，瓶子不能接觸到樣品孔

質(zhì)量控制：

1.如果沒(méi)有出現(xiàn)對(duì)照線，則測(cè)試無(wú)效得重做。如果測(cè)試無(wú)效，則病人結(jié)果不能報(bào)告。

2.全血樣品可能會(huì)在視窗內(nèi)出現(xiàn)紅色的背景值。如果它沒(méi)有遮蓋住測(cè)試線則結(jié)果有效。

3. 質(zhì)量控制需要必須遵照當(dāng)?shù)氐?、州?或國(guó)家法律或委任書和你們實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量程序。建議用戶參照NCLSI C24-A和42 CFR 493.1202(c)中的合適的質(zhì)量控制實(shí)踐指導(dǎo)

結(jié)果解釋：

登革熱初次感染表現(xiàn)為發(fā)熱后3~5天能檢測(cè)到IgM抗體。二次感染表現(xiàn)為感染發(fā)作后的1~2天特異性IgG水平升高，還經(jīng)常伴有IgM水平的升高。應(yīng)該結(jié)合IgM和IgG測(cè)試線來(lái)解釋結(jié)果。單獨(dú)的線分析可能不夠準(zhǔn)確。

C：對(duì)照線  M：IgM測(cè)試線  G：IgG測(cè)試線

初次感染

在IgM和對(duì)照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測(cè)試說(shuō)明IgM抗體陽(yáng)性，且表明有初次登革熱感染。

二次感染

在IgM、IgG和對(duì)照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測(cè)試說(shuō)明IgM和IgG抗體陽(yáng)性，且表明二次登革熱感染。

二次感染

在IgG和對(duì)照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

測(cè)試說(shuō)明IgG抗體陽(yáng)性，且表明二次登革熱感染。

陰性

僅僅在對(duì)照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶

沒(méi)有檢測(cè)到IgM和IgG抗體。結(jié)果不能排除登革熱感染。如果懷疑有登革熱感染，則在3~4天后重新測(cè)試。

無(wú)效

在對(duì)照區(qū)域沒(méi)有出現(xiàn)粉紅色條帶

測(cè)試無(wú)效得重做。

測(cè)試的局限性：

1.一個(gè)單獨(dú)測(cè)試樣本的分析不能作為診斷的weiyi標(biāo)準(zhǔn)。

2.在早期感染和一些二次感染中， IgM抗體的可檢測(cè)水平可能很低。一些病人在感染后的頭7~10天可能不會(huì)產(chǎn)生可檢測(cè)到水平的抗體。只要癥狀還存在，我們就建議在第一份樣本后的3~4天對(duì)病人重新進(jìn)行測(cè)試。

3. 和黃病毒屬出現(xiàn)血清學(xué)交叉反應(yīng)是常見的事（即在登革熱1，2，3，4型和圣路易腦炎、西尼羅河、日本腦炎、黃熱病病毒等之間）。

4.最終的診斷應(yīng)建立在結(jié)合測(cè)試結(jié)果和其它臨床和實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)之上。

5. 不能用來(lái)做一般人群的篩查。陽(yáng)性預(yù)值依賴于現(xiàn)存在病毒的可能性。只能對(duì)有臨床癥狀的病人進(jìn)行測(cè)試，或者有可疑暴露時(shí)。

6.抗體的繼續(xù)存在或不存在不能用來(lái)決定治療的成功與否。

7.從免疫抑制病人得來(lái)的結(jié)果解釋要慎重。

8.最佳的測(cè)試結(jié)果來(lái)自發(fā)熱后的6~14天采集的樣本。

性能鑒定數(shù)據(jù)

靈敏性和特異性

為了評(píng)估Panbio Dengue Duo Cassette的靈敏性和特異性，我們用血清、血漿和全血在內(nèi)部和馬來(lái)群島和斯里蘭卡獨(dú)立的試驗(yàn)地點(diǎn)進(jìn)行了試驗(yàn)。

血清

回顧性地選擇的樣本來(lái)自于馬來(lái)群島一個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的臨床懷疑有登革熱感染的病人在住院后采集的冷凍的血清。一組血清包括30對(duì)初次登革熱感染病人的血清、30對(duì)二次感染病人的血清和80份經(jīng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試是登革熱感染陰性病人的血清，對(duì)這些進(jìn)行了評(píng)估。登革熱診斷是建立在內(nèi)部IgM ELISA法和血凝抑制（HAI）測(cè)試的基礎(chǔ)之上的，HAI是用滴度≥1:2560來(lái)定義二次感染的。結(jié)果概括見表1。

血漿

Panbio公司用208份血漿樣本對(duì)Panbio登革熱 Duo小盒的性能進(jìn)行了臨床研究。經(jīng)Panbio登革熱 Duo IgM 和 IgG 捕獲ELISA法認(rèn)定，這208份樣本包括93份血清陰性、32份初次感染和83份二次感染樣本。結(jié)果概括見表2。

全血

斯里蘭卡的一個(gè)研究所測(cè)試了331份全血和血清樣本，這些樣本來(lái)自于那些因符合登革熱感染體征和癥狀而送到醫(yī)院的病人。這組包括74份血清陰性、77份初次感染和180份二次感染樣本。用試劑盒內(nèi)提供的MicroSafe移液管采集手指血，用Panbio 登革熱Duo小盒來(lái)測(cè)試。在靜脈采集得到血清，再用Panbio登革熱Duo IgM 捕獲 和 IgG 捕獲 ELISA (E-DEN01D)來(lái)確定。測(cè)試結(jié)果與登革熱的血清狀況進(jìn)行比較以測(cè)定那方法用來(lái)測(cè)定全血樣本時(shí)的靈敏性，特異性和一致性。結(jié)果概括見表3。

.95% CI*

相對(duì)血清靈敏性 = 104/108   96.3%    90.8 - 99.0%

相對(duì)血清特異性 = 76/80     95.0%    87.7 - 98.6%

相對(duì)血清一致性 = 162/188   86.2%    81.2 - 91.1%

*CI = 可信區(qū)間

95% CI*

相對(duì)血清靈敏性= 110/115   95.7%    92.9 - 98.4%

相對(duì)血清特異性= 77/93    82.8%    77.7 - 87.9%

相對(duì)血清一致性= 178/208  85.6%    80.8 - 90.4%

*CI =可信區(qū)間

95% CI*

相對(duì)血清靈敏性= 231/257   89.9%    86.2 - 93.6%

相對(duì)血清特異性= 66/74     89.2%    82.1 - 96.3%

相對(duì)血清一致性= 274/331   82.8%    78.7 - 86.8%

*CI =可信區(qū)間

交叉反應(yīng)

通過(guò)測(cè)試一組208份來(lái)自其它確診病人（非登革熱）的血清來(lái)測(cè)定Panbio登革熱Duo小盒的診斷特異性。還測(cè)試了一組來(lái)自沒(méi)有證據(jù)表明感染的受試者的血清。結(jié)果概括參見表4。

表4 Panbio登革熱Duo小盒交叉反應(yīng)性研究

重現(xiàn)性

為了測(cè)定Panbio登革熱Duo小盒的重現(xiàn)性，我們用3個(gè)批號(hào)的試劑盒在不同的3天對(duì)9份血清進(jìn)行測(cè)試。那9份血清代表了登革熱初次感染、二次感染和沒(méi)有感染，然后將那測(cè)試結(jié)果和參照結(jié)果進(jìn)行了比較。在15分鐘時(shí)讀取組內(nèi)和組間測(cè)試結(jié)果，并概括見表5。

初次感染是建立在IgM陽(yáng)性和IgG陰性讀數(shù)基礎(chǔ)之上的。二次感染是建立在IgG陽(yáng)性和IgM陽(yáng)性或陰性讀數(shù)基礎(chǔ)之上的。所有的對(duì)照線都是陽(yáng)性的。

說(shuō)明：健侖生物為澳大利亞Panbio公司系列產(chǎn)品中國(guó)地區(qū)總代理。此本中文版說(shuō)明書是由廣州健侖生物科技有限公司研究人員翻譯，過(guò)程中如有錯(cuò)漏之處，請(qǐng)以廠家英文版說(shuō)明書為準(zhǔn)。謝謝！


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