副溶血弧菌核酸檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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將RNA溶解于DEPC H2O中，喺65℃中溫育10min左右，冷卻至室溫之后加等訂2×上呀緩沖液，撈勻后上柱，即刻有冇收集瀉液。當(dāng)RNA上呀液全部進(jìn)入柱床后，而且用一×上呀緩沖液洗柱，繼續(xù)有冇收集瀉液。
5.將所有瀉液于65℃加熱5min，冷卻至室溫后再次上柱，有冇收集瀉液。
6.用5-10倍柱床體積嘅一×上呀緩沖液洗柱，每理1ml分部有冇收集，OD260測(cè)定RNA含量。前地方有冇收集理中瀉液?jiǎn)﨩D260值好高，其內(nèi)含物為無(wú)Poly（A）落尾嘅RNA。后地方有冇收集理中瀉液?jiǎn)﨩D260值好低或者無(wú)吸走啲。
7.用2-3倍柱容積嘅打緩沖液打Poly（A）RNA，分部有冇收集，每地方為1/3-1/2柱體積。
8.OD260測(cè)定Poly（A）RNA分布，合并含Poly（A）RNA嘅有冇收集理，加1/10體積3M NaAc（pH5.2）、2.5倍體積嘅預(yù)凍無(wú)水乙醇，撈勻，-20℃放置30min。
9.4℃離心，10000g×15min，因住食棄上清。用70%乙醇洗滌沉淀。[注意：此時(shí)Poly（A）RNA嘅沉淀往往睇唔到]。4℃離心，10000g×5min，棄上清，室溫晾干。
10.用適量嘅DEPC H2O溶解RNA。
注意事項(xiàng)

1.成實(shí)驗(yàn)過程一定要防止Rnase嘅污染。
2.步驟（4）中將RNA溶液置65℃中溫育，然后冷卻至室溫再上樣嘅目的系有兩個(gè)，一個(gè)系破壞RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，尤其系mRNA Poly（A）落尾處二級(jí)結(jié)構(gòu)，令Poly（A）落尾充分穿煲，從而提高Poly（A.）RNA嘅回收率；另外一個(gè)目的系可以解離mRNA與rRNA嘅結(jié)合，否則會(huì)導(dǎo)致rRNA嘅污染。所以此步驟唔省略。
3.十二烷基肌氨酸鈉鹽喺18℃以下溶解度下降，會(huì)阻滯柱（液體流動(dòng)，若室溫低于18℃zuihao用LiCl替代NaCl。
4.寡聚（dT）-纖維素柱可喺4℃貯存，反復(fù)使用。次次使用前應(yīng)該依次用NaOH、滅菌ddH2O、上呀緩沖液洗柱。