PCR實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)儀器設(shè)備相關(guān)介紹內(nèi)容由山東濟(jì)南卓隆生物自行提供。PCR實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分為四個(gè)區(qū)
1,試劑準(zhǔn)備區(qū)
2,標(biāo)本制備區(qū)
3,核酸擴(kuò)增區(qū)
4,產(chǎn)物分析區(qū)
各試驗(yàn)區(qū)必須遵循單一方向進(jìn)行,試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗傳遞。
![](https://img77.chem17.com/ebdff42d88c83dd2339a755ddf2a0432e7201daf9dec0c0d6242c2c29e73c9a2ef29761fdd2d515a.jpg)
一.PCR擴(kuò)增液配制(試劑準(zhǔn)備區(qū)):
1.將PCR反應(yīng)液,陰性質(zhì)控品,陽(yáng)性質(zhì)控品,從-20℃冰箱中取出解凍后,用旋渦混勻儀混勻后,再用離心機(jī)瞬時(shí)離心。
2.將PCR反應(yīng)液依據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)按照相應(yīng)比例在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制到離心管中,用旋渦混勻儀混勻,再用離心機(jī)瞬時(shí)離心30秒。
3.在超凈工作臺(tái)中用移液器將PCR擴(kuò)增液分裝在八連管中,用離心機(jī)瞬時(shí)離心30秒后,通過(guò)傳遞窗轉(zhuǎn)移至標(biāo)本制備間。
![](https://img78.chem17.com/ebdff42d88c83dd2339a755ddf2a04320c412d92da331b6b3b9550686f591cda36c7a1fdb7a9af31.jpg)
二.核酸提取(磁珠法):
1.從生物安全運(yùn)輸箱中取出樣本,檢查確認(rèn)無(wú)泄漏后,放入水浴鍋或病毒滅火箱中56℃,30分鐘滅活后移至生物安全柜中開(kāi)蓋。
2.在生物安全柜中用移液器將樣本分別加入到96深孔板中。
3.將96深孔板放入核酸提取儀中進(jìn)行核酸提取。
![](https://img77.chem17.com/ebdff42d88c83dd2339a755ddf2a04327d5fb583be9792a7ed16e0e3465000dbe566bb1d306bd93c.jpg)
三.PCR擴(kuò)增分析:將八連管放入離心機(jī)瞬時(shí)離心后,分別放入熒光定量PCR儀中,進(jìn)行擴(kuò)增分析。
注意:
1.PCR反應(yīng)液,陰性質(zhì)控品,陽(yáng)性質(zhì)控品反復(fù)冷凍不要超過(guò)5次。
2.純化的核酸可保存在2-8℃冷藏箱中24小時(shí),可在-80℃低溫冰箱中長(zhǎng)期保存(建議不超過(guò)一周)。
3.廢棄耗材試劑要在高壓蒸汽滅菌器中滅菌后,方可拿出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步處理。
4.流程為單向進(jìn)行,禁止雙向傳遞。
5.PCR擴(kuò)增液配置與核酸提取可同時(shí)進(jìn)行。