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Z小抑菌濃度測(cè)定試驗(yàn)(營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法)

閱讀:3355        發(fā)布時(shí)間:2018/3/28
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1 原  理 

   本試驗(yàn)將不同濃度的抑菌劑混合溶解于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,然后接種細(xì)菌,通過(guò)細(xì)菌的生長(zhǎng)與否,確定抑菌劑抑制受試菌生長(zhǎng)的zui低濃度,即zui小抑菌濃度(MIC)。本方法適用于溶出性抑菌產(chǎn)品zui低抑菌濃度的測(cè)定。  

 

2 實(shí)驗(yàn)器材 

(1)實(shí)驗(yàn)菌株  金黃色葡萄球菌(ATCC 6538),大腸桿菌(8099或ATCC 11229),可根據(jù)抑菌劑的用途,選擇特定的菌株  

(2)營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基   

(3)稀釋液   

(4)吸管、試管

(5)37℃恒溫培養(yǎng)箱。

 

3 操作步驟 

(1)制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌懸液 

(2)含抗菌劑培養(yǎng)基配制:將抗(抑)菌溶液用蒸餾水做對(duì)倍系列稀釋成不同濃度的受試液,取各稀釋度受試液 2.5mL 加入到含 2.5mL 雙倍濃度營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中。 

(3)取 0.1mL 含菌量約為 108
cfu/mL 菌懸液接種于含抗(抑)菌劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中,作為試驗(yàn)組樣本。 

(4)以同樣方法接種不含抗(抑)菌劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中,作為陽(yáng)性對(duì)照組樣本。

(5)取2支含營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管,作為陰性對(duì)照組樣本。 

(6)將試驗(yàn)組樣本、陽(yáng)性對(duì)照組樣本及陰性對(duì)照組樣本放置 37℃恒溫培養(yǎng)箱中,培養(yǎng) 48h,觀察結(jié)果。 
(7)試驗(yàn)中應(yīng)將試驗(yàn)用菌懸液進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù),其作用濃度應(yīng)為 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL。

 

4 評(píng)價(jià)規(guī)定 

當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照管有細(xì)菌生長(zhǎng)(混濁),陰性對(duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng)(透明),試驗(yàn)用菌懸液的作用濃度為 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL 時(shí), 試驗(yàn)組無(wú)菌生長(zhǎng)的zui高稀釋度所對(duì)應(yīng)的抗(抑)菌劑濃度,為該樣品對(duì)受試菌的MIC。

 

5 注意事項(xiàng) 

接種時(shí),應(yīng)由低抗(抑)菌劑濃度向高濃度依次接種。

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