奧林巴斯CKX53細胞熒光觀察顯微鏡

以下是使用奧林巴斯 CKX53 進行細胞熒光觀察的具體內(nèi)容：

奧林巴斯CKX53準備工作

儀器檢查：取下顯微鏡的防塵罩，檢查顯微鏡各部件是否正常，如光源能否正常發(fā)光、熒光濾光片是否在位且無損壞等。

樣品準備：將帶有熒光標記的細胞樣本制備好，如細胞爬片經(jīng)固定、通透、封閉等處理后，與相應的熒光抗體或熒光染料進行孵育，然后用緩沖液沖洗，最后可將其放置在載玻片上，用封片劑封片。若是細胞培養(yǎng)皿中的細胞，確保細胞狀態(tài)良好且分布均勻。

選擇熒光通道：根據(jù)所使用的熒光標記物的激發(fā)和發(fā)射波長，選擇對應的熒光濾塊或熒光通道。

奧林巴斯CKX53操作步驟

打開照明系統(tǒng)：打開顯微鏡后部的光源，確保照明系統(tǒng)正常工作，顯微鏡后部光源燈亮起。如果是汞燈，需要提前開啟預熱 5-10 分鐘，以保證光源穩(wěn)定。

放置樣品：將細胞培養(yǎng)容器或載玻片平穩(wěn)放置在顯微鏡的載物臺上，使用標本適配器或夾具固定好，確保樣品正確對齊。

取下物鏡保護蓋：取下顯微鏡載物臺上的物鏡保護蓋，準備進行觀察。

調(diào)整雙目鏡寬度：使用顯微鏡時，調(diào)整雙目鏡的寬度，使雙眼能看到同一視場。

移動樣品：轉(zhuǎn)動顯微鏡右側(cè)與載物臺相連的手柄，將樣品被觀察部位移動到視場下。

粗調(diào)焦距：緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕，當視場內(nèi)出現(xiàn)模糊的圖像時，停止粗調(diào)。

微調(diào)焦距：改為轉(zhuǎn)動微調(diào)旋鈕，直到整個視場內(nèi)出現(xiàn)清晰的圖像。

準備熒光系統(tǒng)：從熒光照明器 CKX3 - RFA 上取下汞燈箱 U - LH100HG 或液體光導適配器 U - LLGAD，并插入用于反射熒光照明的光閘。

選擇熒光鏡組：握住并滑動熒光照明器的熒光鏡組選擇拉桿，將要用于觀察的熒光鏡組轉(zhuǎn)入光路。

調(diào)節(jié)光路：更換相應的熒光濾光片，并調(diào)整光源至適合熒光觀察的波長。

調(diào)節(jié)視場光闌：將 B - 激發(fā)熒光鏡組轉(zhuǎn)入光路，根據(jù)需要調(diào)節(jié)視場光闌，以獲得最佳的熒光觀察效果，減少雜散光。

奧林巴斯CKX53觀察與記錄

熒光觀察：通過目鏡進行觀察，調(diào)節(jié)熒光光源的強度和光路，使熒光圖像清晰、明亮、對比度合適。注意避免長時間觀察導致熒光淬滅和細胞光損傷。

多通道觀察（如有需要）：如果樣本中使用了多種熒光標記物，可通過切換不同的熒光通道，分別觀察不同熒光信號的分布和表達情況，并進行圖像的疊加和分析。

圖像記錄：使用顯微鏡自帶的數(shù)碼相機或連接的電腦圖像采集系統(tǒng)，對觀察到的熒光圖像進行采集和保存，合理設(shè)置曝光時間、增益等參數(shù)，以獲取清晰、準確的圖像。

奧林巴斯CKX53細胞熒光觀察顯微鏡注意事項

熒光光源的使用：熒光光源如汞燈有一定的使用壽命，且頻繁開關(guān)會縮短其壽命，打開后 20 分鐘內(nèi)不得關(guān)閉，關(guān)閉后 20 分鐘之內(nèi)不得打開。

防止熒光淬滅：在觀察過程中盡量縮短觀察時間，避免長時間照射熒光樣本?？蓪⒑蠓綗晒鈸醢逭{(diào)至半遮擋狀態(tài)，減少光損傷。

樣品保存：熒光標記的樣品應盡快進行觀察，避免長時間放置導致熒光信號減弱。