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使用奧林巴斯進(jìn)口顯微鏡 CKX53 觀察組織切片一般有以下步驟:
前期準(zhǔn)備
熟悉顯微鏡操作:了解 CKX53 顯微鏡的各個(gè)部件及其功能,如光源調(diào)節(jié)旋鈕、粗細(xì)準(zhǔn)焦螺旋、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)調(diào)節(jié)旋鈕等。
檢查顯微鏡:確保顯微鏡的光源工作正常,亮度可調(diào)節(jié)。檢查物鏡和目鏡是否干凈,如有灰塵或污漬,需用專用的擦鏡紙輕輕擦拭干凈。
準(zhǔn)備切片:從切片盒中取出需要觀察的組織切片,檢查切片是否完整、無(wú)破損,切片上的組織是否有脫落等情況。確保切片已經(jīng)過(guò)合適的染色處理,如常用的 HE 染色,以便于觀察細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
顯微鏡操作與觀察
放置切片:打開(kāi)顯微鏡載物臺(tái)的壓片夾,將組織切片平穩(wěn)地放置在載物臺(tái)上,使切片上的組織部位正對(duì)著通光孔中心,然后輕輕合上壓片夾,固定切片。
低倍鏡觀察
調(diào)節(jié)光源:打開(kāi)光源開(kāi)關(guān),通過(guò)調(diào)節(jié)亮度旋鈕,使光線強(qiáng)度適中。一般來(lái)說(shuō),開(kāi)始觀察時(shí),光線不宜過(guò)強(qiáng),以免影響對(duì)組織形態(tài)的整體判斷。
粗調(diào)焦距:轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使載物臺(tái)上升,同時(shí)從側(cè)面觀察物鏡與切片的距離,直到物鏡接近切片,但不要接觸到切片,避免壓碎切片或損壞物鏡。然后通過(guò)目鏡觀察,反向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使載物臺(tái)緩慢下降,直到能看到組織切片的大致圖像。
微調(diào)焦距:使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行微調(diào),使圖像更加清晰。在低倍鏡下對(duì)整個(gè)組織切片進(jìn)行全面觀察,了解組織的整體結(jié)構(gòu)、形狀、大小,以及病變組織在整個(gè)切片中的大致位置和范圍,確定需要進(jìn)一步觀察的區(qū)域。
中倍鏡觀察
轉(zhuǎn)換物鏡:在低倍鏡下找到感興趣的區(qū)域后,將其移至視野中央,然后輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器,將低倍物鏡轉(zhuǎn)換為中倍物鏡,通常為 20 倍物鏡。
重新調(diào)焦:轉(zhuǎn)換物鏡后,由于不同物鏡的焦距略有差異,可能需要再次微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使圖像清晰。在中倍鏡下可以更清楚地觀察組織的層次結(jié)構(gòu)、細(xì)胞的排列方式、組織與組織之間的關(guān)系等,進(jìn)一步確定病變的具體部位和特征。
高倍鏡觀察
再次轉(zhuǎn)換物鏡:將中倍鏡下觀察到的重點(diǎn)區(qū)域移至視野中央,轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器,換用高倍物鏡,一般為 40 倍或更高倍數(shù)的物鏡。
精細(xì)調(diào)焦:高倍鏡下視野變小,圖像放大倍數(shù)更高,此時(shí)只需輕微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,就能使圖像達(dá)到最佳清晰狀態(tài)。在高倍鏡下仔細(xì)觀察細(xì)胞的形態(tài)、大小、細(xì)胞核的形態(tài)、染色質(zhì)的分布、細(xì)胞質(zhì)的顏色和質(zhì)地等細(xì)節(jié),分析細(xì)胞是否存在異常變化,如細(xì)胞形態(tài)的改變、細(xì)胞核的增大或縮小、核仁的明顯程度等,判斷組織是否存在病變以及病變的類型和程度。
觀察記錄與結(jié)束工作
記錄觀察結(jié)果:可以使用顯微鏡自帶的圖像采集系統(tǒng)對(duì)典型的觀察圖像進(jìn)行拍攝保存,也可以通過(guò)手繪的方式,繪制出觀察到的組織細(xì)胞形態(tài)和病變特征,并標(biāo)注出關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和病變部位。同時(shí),在實(shí)驗(yàn)記錄本上記錄下觀察到的主要現(xiàn)象、病變特征、切片編號(hào)等信息,以便后續(xù)的分析和總結(jié)。
整理顯微鏡:觀察結(jié)束后,關(guān)閉顯微鏡光源開(kāi)關(guān),將物鏡轉(zhuǎn)回到低倍鏡位置,松開(kāi)壓片夾,取下切片,將切片放回切片盒中妥善保存。用擦鏡紙將物鏡和目鏡擦拭干凈,如有必要,可使用少量的二甲苯等有機(jī)溶劑擦拭沾有油漬或污漬的鏡頭,但要注意擦拭后及時(shí)用干凈的擦鏡紙擦干,防止溶劑殘留損壞鏡頭。
清理臺(tái)面:清理顯微鏡載物臺(tái)和周圍的雜物,保持實(shí)驗(yàn)臺(tái)面整潔干凈。
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