熒光顯微鏡的一個(gè)重要特點(diǎn)是它能夠探測(cè)到熒光的對(duì)象，有時(shí)隱隱可見，甚非常明亮與黑暗的背景（通常是黑色）。為了優(yōu)化此功能，使用的引物在該部分將要討論的原則，圖像的亮度和分辨率必須大化。

圖像亮度 - 優(yōu)化的圖像的亮度的重要的方面之一是，以確保在每個(gè)連接到試樣的發(fā)色基團(tuán)的適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)，樣品被提供用于激勵(lì)具有足夠的光能量。同樣重要的是，選擇適當(dāng)?shù)膿醢鍨V光鏡，向觀察管或攝像管發(fā)射的熒光的量大化。我們已經(jīng)組建了一個(gè)表列出的熒光激發(fā)和發(fā)射數(shù)據(jù)，這將有助于實(shí)現(xiàn)這一物鏡。高能量的光源，如汞和氙氣的燃燒器，將提供大量的激發(fā)能在非常窄的范圍的近紫外和可見光。當(dāng)使用這些光源耦合到同時(shí)阻擋那些是不希望的，能夠發(fā)送所選波長(zhǎng)的激發(fā)濾光鏡，適當(dāng)?shù)剡x擇，然后將滿足用于激發(fā)的佳標(biāo)準(zhǔn)。

擋板濾光鏡，防止不需要的波長(zhǎng)進(jìn)入觀察管的選擇是一個(gè)主要問(wèn)題。激發(fā)的總能量是遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于發(fā)射的能量，因此，重要的是要選擇一個(gè)有效的擋板濾光鏡，將阻止不必要的波長(zhǎng)熒光發(fā)射，同時(shí)允許從樣品通過(guò)。為熒光選擇的物鏡必須能夠有效地透射光，在近紫外區(qū)域和在整個(gè)可見光譜。

在低發(fā)射的光水平的圖，在熒光顯微鏡中的作用的物鏡是非常重要的，因?yàn)樗鞘占瘉?lái)自樣本的光的物鏡的功能。物鏡所接受的光的錐角是由數(shù)值孔徑（NA）為物鏡來(lái)確定，如在圖1中示出。在透射光中的熒光顯微鏡，到達(dá)眼睛或其它檢測(cè)器的光的強(qiáng)度成正比作為物鏡和聚光鏡的總放大倍數(shù)的平方成反比的數(shù)值孔徑的平方。

這種差異來(lái)作為物鏡的初功能作為一個(gè)聚光鏡，用于在樣本上的光聚光，然后作為用于圖像形成的通常的光采集的結(jié)果。其意義是顯而易見的：高數(shù)值孔徑物鏡會(huì)產(chǎn)生高得多的強(qiáng)度比相同的放大倍數(shù)較低的數(shù)值孔徑的物鏡圖像。例如，其他的事情都是平等的，40倍物鏡的NA為1.0將帶來(lái)超過(guò)5倍的亮度比40倍物鏡的數(shù)值孔徑為0.65的圖像。進(jìn)一步的含義是，如果可能的話，低倍率的視覺(jué)目鏡（如8倍的放大倍率）也將增加圖像的亮度相比，比較常用的10X觀察目鏡。此外，在反射光中的熒光，激發(fā)光被濃縮的物鏡（在其作為聚光鏡的功能），僅在被觀察的區(qū)域。其結(jié)果的激勵(lì)光的強(qiáng)度遠(yuǎn)高于在透射光中的暗視野熒光，其中被激發(fā)的面積不改變作為物鏡被改變。此外，在暗視野，物鏡的數(shù)值孔徑必須被減小到低于保存的視場(chǎng)的黑暗的聚光鏡。

除了是一個(gè)重要的考慮因素的數(shù)值孔徑，這是可取的有高質(zhì)量的色差校正的物鏡，因?yàn)榫劢乖谕黄矫嫔系母鞣N顏色，將產(chǎn)生更清晰的圖像。另外，更好的球面校正，更清晰的圖像。因此中，物鏡的選擇是平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡或平場(chǎng)熒光物鏡。的設(shè)計(jì)應(yīng)使這些透鏡元件及其水泥本身不會(huì)自動(dòng)熒光時(shí)，低于400納米的波長(zhǎng)（光在近紫外）光照射。

在可能的情況下，應(yīng)采用油浸物鏡，從載玻片和蓋玻片表面反射所造成的光損失減少到小。現(xiàn)代顯微鏡商努力為客戶提供光學(xué)元件是*免費(fèi)的自體熒光污染物，但是這方面也應(yīng)考慮自體熒光將減少通過(guò)增加背景亮度對(duì)比樣品。

燈箱結(jié)構(gòu)