12391 凱杰Qiagen無內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5TEndoFree Plasmid Giga Kit，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號：12391
產(chǎn)品名稱：無內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Giga Kit
產(chǎn)品規(guī)格：5T

凱杰Qiagen12391無內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒EndoFree Plasmid Giga Kit 5T

凱杰QIAGEN作為創(chuàng)新市場和技術(shù)的領(lǐng)dao者，憑借強大的樣本制備和分析技術(shù)，實現(xiàn)各種生物樣本內(nèi)容物的高品質(zhì)純化、分析。我們致力于幫助客戶在生命科學(xué)研究、應(yīng)用檢測、制藥、和分子診斷領(lǐng)域獲得成功和突破性進展。由此讓生活的改善成為可能。我們秉承市場、客戶、病患至上的理念，不斷推進多領(lǐng)域的創(chuàng)新和發(fā)展，充分發(fā)揮我們的樣本制備和分析技術(shù)專長

我們北京諾博萊德科技有限公司作為QIAGEN公司的特約經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進口，貨期穩(wěn)定，折扣好的服務(wù)標準。

12391 凱杰Qiagen無內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Giga Kit ，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號：12391
產(chǎn)品名稱：無內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Giga Kit
產(chǎn)品規(guī)格：5T

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12391 凱杰Qiagen無內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Giga Kit ，產(chǎn)品說明：

特征

l  達到小于 0.1 EU/μg DNA

l  綜合內(nèi)*素去除

l  高拷貝質(zhì)粒 DNA 的高產(chǎn)量

l  LyseBlue 可實現(xiàn)*佳裂解和最大 DNA 產(chǎn)量

產(chǎn)品詳情

無內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒提供基于陰離子交換的快速無內(nèi)*素質(zhì)粒 DNA 純化。QIA過濾器濾芯可通過過濾快速清除裂解物。純化的DNA純度超過2 x CsCl梯度離心獲得的純度，適用于高級轉(zhuǎn)染級應(yīng)用。EndoFree質(zhì)粒緩沖液組合可用于制備10 mega或5 giga轉(zhuǎn)染級質(zhì)?；?span>cosmid DNA制劑。

Performance

EndoFree質(zhì)粒試劑盒將高效的內(nèi)*素去除步驟集成到質(zhì)粒純化程序中——無需額外的提取或親和柱來去除脂多糖。細菌裂解物通過QIAfilterMega-Giga或Maxi濾芯過濾進行清除，質(zhì)粒DNA在含有陰離子交換樹脂的重力流QIAGEN尖duan上純化。從培養(yǎng)物中純化 DNA 可獲得高達 10 mg （giga）、2.5 mg（兆）和 500 μg（*大）的純化 DNA（培養(yǎng)體積取決于質(zhì)?？截悢?shù)、插入片段大小、宿主菌株和培養(yǎng)基）。純化的DNA不含內(nèi)*素（<0.1 EU/μg DNA）。

對于低拷貝質(zhì)粒和cosmid的純化，由于所需的培養(yǎng)體積大且QIAfilter超千兆質(zhì)粒試劑盒的容量有限，因此EndoFree質(zhì)粒Mega試劑盒是比EndoFree Giga質(zhì)粒試劑盒*好的選擇。

無內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒可去除裂解步驟中釋放的細菌內(nèi)*素，并影響DNA轉(zhuǎn)染到原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞中。從EndoFree質(zhì)粒試劑盒獲得的無內(nèi)*素DNA非常適合在轉(zhuǎn)染中獲得可重復(fù)且可靠的結(jié)果。QIAGEN超純無內(nèi)*素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制劑中的內(nèi)毒素水平*

EndoFree DNA可提高原代細胞的轉(zhuǎn)染效率*

*原代兔胃壁細胞轉(zhuǎn)染用按所示方法制備的pEGFP-N2（CLONTECH）。使用Effectene轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染。數(shù)據(jù)表示表達GFP的細胞百分比，通過對轉(zhuǎn)染后48小時的綠色熒光細胞數(shù)量進行評分來確定。每種純化方法的轉(zhuǎn)染效率代表來自6種以上不同DNA制備的9至2個重復(fù)培養(yǎng)皿的平均效率。（數(shù)據(jù)由美國佐治亞州奧古斯塔佐治亞醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)和遺傳學(xué)系 C. Chew 和 J. Parente 提供。

Principle

純化質(zhì)粒DNA中的內(nèi)*素污染水平取決于所使用的純化方法。二*化硅漿液純化的DNA表現(xiàn)出ji高的內(nèi)*素水平。QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed質(zhì)粒試劑盒以及2x CsCl超速離心可產(chǎn)生非常純的DNA，內(nèi)*素水平相對較低。EndoFree 質(zhì)粒試劑盒包括一個集成的內(nèi)毒素去除步驟，可產(chǎn)生含有 <0.1 EU/μg 質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)粒 DNA。

QIAfilter試劑盒以QIAfilter、HiSpeed和EndoFree質(zhì)粒試劑盒形式提供，是特殊的過濾裝置，旨在取代細菌細胞堿性裂解后的離心。QIAfilter濾芯可wan全去除SDS沉淀物并清除細菌裂解物，所需時間僅為離心所需時間的一小部分，從而將質(zhì)粒純化時間縮短多達1小時。QIAfilter超級千兆濾芯在室內(nèi)真空下運行，以*小的努力有效地清除大量細*裂解物（請注意，瓶子不包括在套件中）。QIAfilter Maxi 濾芯具有注射器形式，通過將液體推入過濾器，可在幾秒鐘內(nèi)清除裂解物。

QIAGEN-tips中du特的陰離子交換樹脂專為核酸純化而開發(fā)。其zhuo越的分離特性使DNA純度等于或優(yōu)于連續(xù)兩輪CsCl梯度離心獲得的DNA純度。預(yù)包裝的QIAGEN吸頭通過重力流運行，永bu干涸，*大限度地減少了質(zhì)粒制備所需的手動操作時間。整個QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)避免使用ben酚、氯仿、溴化乙錠和氯化銫等有毒物質(zhì)，最大限度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素，也稱為脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性細菌的細胞膜成分。內(nèi)*素在質(zhì)粒純化的裂解步驟中釋放，并顯著降低內(nèi)*素敏感細胞系的轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素可以通過與DNA競爭“游離"轉(zhuǎn)染試劑來影響轉(zhuǎn)染實驗中質(zhì)粒DNA的攝取。內(nèi)*素還會誘導(dǎo)巨噬細胞和B細胞等免疫細胞中免疫應(yīng)答的非特異性激活，從而導(dǎo)致對轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤解。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成，如IL-1和前列腺素?？傮w而言，內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染實驗設(shè)置中不可控的變量，會影響結(jié)果和結(jié)果的可重復(fù)性，使其難以比較和解釋。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可以通過引起內(nèi)毒性休克綜合征和補體級聯(lián)反應(yīng)的激活來干擾。

Procedure

細*細胞在堿性條件下裂解，并使用QIAfilter濾芯清除粗裂解物。在此階段，將內(nèi)毒*素去除緩沖液添加到過濾后的裂解物中，在冰上孵育。然后將澄清的裂解物加載到陰離子交換尖duan，質(zhì)粒DNA在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下選擇性結(jié)合。通過中鹽洗滌除去RNA、蛋白質(zhì)、代謝物和其他低分子量雜質(zhì)，并在高鹽緩沖液中洗脫超純質(zhì)粒DNA。DNA通過異丙醇沉淀濃縮和脫鹽，并通過離心收集。

Applications

使用無內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒純化的DNA適用于任何敏感應(yīng)用，包括：

l  轉(zhuǎn)染，包括原代細胞、敏感細胞和懸浮細胞

l  基因治療研究

l  基因沉默

l  注射

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