Nucleofector™ Technology 

Amaxa核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，一直被模仿，*

 Amaxa細胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

簡介：Nucleofector核轉(zhuǎn)染技術(shù)

隨著系統(tǒng)生物學(xué)與交叉學(xué)科方法的應(yīng)用，要求細胞和系統(tǒng) 模型越來越接近體內(nèi)細胞的功能。這就意味著將來的細胞 轉(zhuǎn)染多數(shù)會是原代細胞的轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的方法很難成功轉(zhuǎn) 染原代細胞。另外即使使用細胞系做為系統(tǒng)模型，傳統(tǒng)的 方法也難重復(fù)出好的轉(zhuǎn)染效率與成活率。Nucleofector 技術(shù)就從根本上解決這個問題。無論是原代細胞、干細胞 還是細胞系，它每次都可重復(fù)出很高的轉(zhuǎn)染效率。 1998年，Nucleofector技術(shù)開發(fā)成功，2001年上市，是市場 上一個有效的、非病毒介導(dǎo)的、用于原代細胞與難轉(zhuǎn)染細 胞系的轉(zhuǎn)染方法。現(xiàn)在Lonza還在繼續(xù)不斷改革創(chuàng)新，為研 究者推出更多更好的新產(chǎn)品。

Amaxa細胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)原理：

NucleofectionTM技術(shù)是利用電擊在細胞膜上穿個小孔。并且 綜合優(yōu)化了各種特定細胞轉(zhuǎn)染程序與轉(zhuǎn)染液，使得轉(zhuǎn)染物質(zhì) （如DNA、RNA等）不僅可以進入細胞質(zhì)，而且可直接通過核 膜進入細胞核。這使得細胞的轉(zhuǎn)染效率高可達99%。

Nucleofector技術(shù)的組成：

Nucleofector技術(shù)由Nucleofector儀器、細胞轉(zhuǎn)染試劑和操作 手冊組成

※ Nucleofector儀器：

1. 模塊化設(shè)計，各模塊可單獨配置；

2. 核心模塊內(nèi)置各種細胞優(yōu)化的電極參數(shù)，可直接選擇；

3. X模塊提供中低通量(1-16樣)，中低細胞數(shù)量(約1e+5 到1e+7)轉(zhuǎn)染；

4. Y模塊提供24孔板直接貼壁轉(zhuǎn)染；

5. 96模塊提供高通量(96樣)，低細胞數(shù)量(約1e+5)轉(zhuǎn)染；

6. LV模塊提供低通量，大量細胞直接轉(zhuǎn)染 (1e+8到1e+9)；

※ 試劑盒：包含有轉(zhuǎn)染溶液、添加劑、用電極杯、吸管、 陽性對照質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染試劑為細胞轉(zhuǎn)染提供保護，即保證了 高的轉(zhuǎn)染效率與成活率，又幫助細胞維持良好的生理功能 性狀。我們提供有一系列的優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑盒與操作手冊。

※ 數(shù)據(jù)庫與操作手冊：我們的在線數(shù)據(jù)庫提供600種以上細胞 的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)和操作手冊。優(yōu)化的操作手冊除了操作手冊除了 操作指導(dǎo)外，還包括細胞來源、傳代、生長條件、培養(yǎng)基以 及轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)等細節(jié)技巧。

具兼容性的模塊：Nucleofector X模塊

針對不同數(shù)量級的細胞，提供不同的電極杯。

X模塊可以使用兩種不同形式的聚合材料電極，分別是如下 電極杯和電極板條

100ul電極杯

※ 新式可導(dǎo)電材料的電極杯替代了原來鋁制電極杯

※ 低通量但是一次可轉(zhuǎn)較大量的細胞 (適用于生化應(yīng)用或Western Blot實驗)

16孔20ul電極板條

※ 與96孔電極杯的板條一致

※ 中通量，低細胞數(shù)量（報告基因分析，RNAi）

可在相同的條件下轉(zhuǎn)不同數(shù)量的細胞

X模塊使用的相同材質(zhì)制成的20ul電極板條與100ul電極杯，X模塊中不同的電極模式可選用相同的電轉(zhuǎn)程序(系 統(tǒng)可自動轉(zhuǎn)化應(yīng)用于不同模塊的參數(shù)，客戶無需進行額 外操作)，實現(xiàn)實驗的方便性與靈活性大化。 一旦其中一種電極形式優(yōu)化好，另一種就很容易轉(zhuǎn)化好。 不同通量的電轉(zhuǎn)條件也很容易轉(zhuǎn)化。 96孔模塊的操作手冊也適用于X模塊。

貼壁轉(zhuǎn)染模塊 4D-Nucleofector Y Unit

至今為止基于電轉(zhuǎn)的方法都是要求細胞處于懸浮狀態(tài) Nucleofector進入一個新時代，細胞可以在貼壁狀態(tài) 下直接轉(zhuǎn)染。細胞培養(yǎng)在24孔板中，插入電極板即可 完成轉(zhuǎn)染。

優(yōu)點：

※ 細胞生長在24孔板中，直接轉(zhuǎn)染

※ 可在細胞生長的任何時期進行轉(zhuǎn)染

※ 細胞活力好，轉(zhuǎn)染效率高可達70%

※ 與Clonetics原代動物神經(jīng)元兼容

耗材：

根據(jù)簡化試劑盒的原則，我們提供兩種轉(zhuǎn)染試劑AD1與AD2， 適用于所有細胞類型。試劑盒可按下圖的指示進行選擇：

大量細胞轉(zhuǎn)染：LV模塊

使用4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)系統(tǒng)，用于小量細胞轉(zhuǎn)染的實驗條件，可直接放大， 用于大量細胞的轉(zhuǎn)染。 

LV模塊采用封閉系統(tǒng)，可轉(zhuǎn)染1×107至1×109細胞。轉(zhuǎn)染的條件可使用X模塊， 以小體積進行摸索。之后再使用LV模塊，不需要重新優(yōu)化，即可進行大量細胞 轉(zhuǎn)染。LONZA公司已進行過驗證的細胞有人T細胞、CHO-S、HEK293-S和K562等。 

優(yōu)勢： 

※ 系統(tǒng)封閉 

※ 在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)染多達109細胞； 

※ 系統(tǒng)可放大 

※ 可用小體積優(yōu)化并確定轉(zhuǎn)染條件； 

※ 詳細的操作步驟 

※ 在線數(shù)據(jù)庫中收錄了700多種細胞的實驗條件； 

※ 操作簡單 

※ 簡單的培訓(xùn)即可掌握實驗技術(shù)； 

※ 軟件系統(tǒng) 

※ 操作軟件符合21CFR part11的規(guī)定；

兩種規(guī)格可選：

從小體積少量細胞直接放大到大體積大量細胞

應(yīng)用：

※ 對人原代細胞進行體外基因修飾以用于細胞治療（例如，基因編輯、生產(chǎn)CAR-T細胞）；

※ 瞬時轉(zhuǎn)染后生產(chǎn)治療性蛋白或抗體，進行各種質(zhì)粒的篩選；

※ 瞬時轉(zhuǎn)染大量細胞后用于細胞學(xué)實驗；

96孔模塊

96孔模塊可對原代細胞和各種細胞系提供1-96通量 的實驗條件?？稍O(shè)置96個不同的實驗條件，以得到 優(yōu)的實驗結(jié)果。完整的系統(tǒng)包含3個部分：

※ 4D核轉(zhuǎn)儀(Core+X模塊)來發(fā)送核轉(zhuǎn)程序

※ 96-well Shuttle Device來進行96孔的核轉(zhuǎn)

※ 安裝96-well Shuttle Device軟件的電腦， 用來控制儀器

耗材：

※ 用于原代細胞和各種細胞系的試劑盒

※ 對于未知條件的細胞提供優(yōu)化試劑盒

優(yōu)點：

※ 96個轉(zhuǎn)染孔可單獨設(shè)置轉(zhuǎn)染程序，完成全部核轉(zhuǎn) 只需不到5分鐘

※ 一次核轉(zhuǎn)，實驗96個不同條件，完成條件優(yōu)化

基本款：Nucleofector 2b Device

2001年推出，用于實驗室研究的單管系統(tǒng)，低通量 有效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、RNA等不同底物到原代細胞和難轉(zhuǎn) 染細胞系中。擁有4000篇以上的引用文獻。

耗材：

※ 提供50多種原代細胞，血液細胞及干細胞試劑盒

※ 5種細胞系試劑盒涵蓋了所有種類細胞系

※ cGMP試劑盒適用于蛋白生產(chǎn)應(yīng)用

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