活細(xì)胞/凋亡細(xì)胞/壞死細(xì)胞鑒別試劑盒（AO/EB法.熒光顯微鏡）
凱基活細(xì)胞/凋亡細(xì)胞/壞死細(xì)胞鑒別試劑盒
（ Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
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Expire date：
一、試劑盒說(shuō)明
細(xì)胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細(xì)胞學(xué)現(xiàn)象，二者發(fā)生的過(guò)程在形態(tài)學(xué)上有很大的區(qū)別。在細(xì)胞壞死時(shí)，細(xì)胞膜發(fā)生滲漏，細(xì)胞內(nèi)容物包括細(xì)胞器以及染色質(zhì)釋放到胞外。而在細(xì)胞凋亡過(guò)程，起始階段，染色質(zhì)固縮、分離并沿核膜分布，細(xì)胞質(zhì)亦發(fā)生固縮，但細(xì)胞膜依然完整未失去選擇透性；在凋亡后期，核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片斷，與某些細(xì)胞器如線粒體一起聚集，為反折的細(xì)胞膜所包圍，以后逐漸分離，形成凋亡小體。
本產(chǎn)品提供的染料可以分別對(duì)正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的細(xì)胞核進(jìn)行染色。其染色原理為：Dye Reagent 1只進(jìn)入活細(xì)胞，正常的細(xì)胞核及處于凋亡早期的細(xì)胞核呈現(xiàn)綠色；Dye Reagent 2只能進(jìn)入死細(xì)胞，將死細(xì)胞以及凋亡晚期的細(xì)胞核染成橙色。因此通過(guò)在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞顯色和形態(tài)的不同，可以同時(shí)將正常細(xì)胞、壞死細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞和凋亡晚期細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。
二、試劑盒組份
| 組份 | Cat: KGA501 （50 assays） | Cat: KGA502 （100 assays） | 儲(chǔ)存條件 |
| Dye Reagent 1 | 25μL | 50μL | 室溫避光 |
| Dye Reagent 2 | 25μL | 50μL | 室溫避光 |
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡（510nm激發(fā)波長(zhǎng)）、載玻片、蓋玻片、1.5m L Microtube、微量移液器
四、注意事項(xiàng)
1. Dye Reagent 1、2及Mixed Dyes Reagent有毒，操作時(shí)請(qǐng)戴手套；
2. 根據(jù)需要檢測(cè)的實(shí)際樣品數(shù)在使用前將兩種染料混合，剩余混合染液注意避光保存留待下次使用；
3. 利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行該項(xiàng)操作時(shí)，不要用血計(jì)板配套的那種質(zhì)地較硬的蓋玻片，而用普通的蓋玻片反而更利于結(jié)果的觀察。
五、操作方法
1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
2. 用PBS洗滌細(xì)胞二次，并配成濃度為5×105~6×106cells/ml細(xì)胞懸液；
3. 將Dye Reagent 1和Dye Reagent 2等體積混合形成Mixed Dyes Reagent（見(jiàn)注意事項(xiàng)2）；
4. 吸取25μL的細(xì)胞懸液同1μL的Mixed Dyes Reagent輕輕混勻；
5. 吸取上述10μL的混合液置于一潔凈的載玻片，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞（見(jiàn)注意事項(xiàng)3）；
6. 熒光顯微鏡510nm激發(fā)波長(zhǎng)觀察，分別對(duì)下列四類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，注意細(xì)胞總量須超過(guò)200個(gè)。
正常細(xì)胞：細(xì)胞呈圓形，核質(zhì)體被均勻染成綠色，大小形狀較單一；
壞死細(xì)胞：細(xì)胞呈橢園形，核質(zhì)體被均勻染成橙黃色，大小形狀較單一；
凋亡早期細(xì)胞：核質(zhì)體呈綠色，細(xì)胞形狀不規(guī)則，如呈新月形，；
凋亡晚期細(xì)胞：核質(zhì)體呈橙色，染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，大小不一，可見(jiàn)胞質(zhì)芽狀突起。
n 計(jì)算細(xì)胞凋亡率和壞死率
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