組織單細(xì)胞懸液的制備方法

注：A.組織勻漿液需現(xiàn)用現(xiàn)配，配制方法為：20%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（產(chǎn)品編號(hào)：TBD31HB）

      與 80%F 液（產(chǎn)品編號(hào)：F2013TBD）混勻，備用。

   B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細(xì)胞懸液，請(qǐng)用戶根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室要求另購(gòu)不同類型膠原酶。

1.剪碎法：

（1） 將組織塊放入平皿后，加入少量組織勻漿液；用眼科剪將組織剪至勻漿狀，加入 5ml

      組織勻漿液。

（2） 用吸管吸取組織勻漿，用 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾到離心管內(nèi)。

（3） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。

（4） 用含 80%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（產(chǎn)品編號(hào)：TBD31HB）的樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119），       懸浮沉淀成細(xì)胞濃度為 2×10⁸–1×10⁹/ml 的單細(xì)胞懸液備用。

2.勻漿器法：

（1） 用眼科剪將組織剪成小塊；放入 70ml 組織研磨器內(nèi)，加入 2ml 組織勻漿液；緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)研         棒，研磨至勻漿。

（2） 用 5ml 組織勻漿液沖洗研器；收集細(xì)胞懸液，經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)（另購(gòu)）過(guò)濾到離心管         內(nèi)。

（3） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。

（4） 用含 80% 標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（產(chǎn)品編號(hào)： TBD31HB ）的樣本稀釋液（產(chǎn)品編                 號(hào)：2010C1119），懸浮沉淀成細(xì)胞濃度為 2×10⁸–1×10⁹/ml 的單細(xì)胞懸液備用。

3.酶消化法：

（1） 用 F 液（產(chǎn)品編號(hào)：F2013TBD）將膠原酶稀釋，終濃度為 400U/ml，至于冰浴備用。

（2） 取一適當(dāng)大小培養(yǎng)皿進(jìn)行操作：用鑷子夾碎動(dòng)物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，37℃

      消化 20 分鐘。

（3） 以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)（另購(gòu)）過(guò)濾到離心管內(nèi)。

（4） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。

（5） 用含 80% 標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（產(chǎn)品編號(hào)： TBD31HB ）的樣本稀釋液（產(chǎn)品編                 號(hào)：2010C1119），懸浮沉淀成細(xì)胞濃度為 2×10⁸–1×10⁹/ml 的單細(xì)胞懸液備用。