產(chǎn)品簡介

一步法RT-PCR試劑盒是為從總RNA或mRNA中特異性的反轉(zhuǎn)和擴(kuò)增目的RNA而設(shè)計的。該系統(tǒng)在一種優(yōu)化反應(yīng)體系中共用MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動Taq DNA聚合酶的預(yù)混液，能夠檢測長達(dá)4.0 kb的RNA目的片段。總RNA的用量可從0.01 pg到2 μg之間，該試劑盒為50 μl的反應(yīng)體系。

試劑盒組分

產(chǎn) 品

RT0213-00

RT0213-01

RT0213-02

RT0213-03

Reactions

5

20

50

100

Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix

5 μL

20 μL

50 μL

100 μL

2× Reaction mix （optimized bμffer contains dNTP and Mg²⁺）

125 μL

500 μL

1.25 mL

2×1.25 mL

5 mM Magnesiμm Sμlfate

125 μL

500 μL

1.0 mL

2×1.0 mL

dd H₂O

150 μL

600 μL

1.5 mL

2×1.5 mL

保存條件

該試劑盒-20°C保存，在此條件下可保存二年。

產(chǎn)品特點

方便的一管式設(shè)置
*的RT-PCR緩沖液及性
高度敏感性、特異性及重復(fù)性

推薦RT-PCR反應(yīng)體系

建議用如下組成配制RT-PCR反應(yīng)起始液：

組分

50 μl 體系

終濃度

2× Reaction mix

25 μL

1×

Enzyme mix

1.0 μL

Forward Primer （10 μM）

1.0 μL

200 nM

Reverse Primer （10 μM）

1.0 μL

200 nM

RNA template

× μL

Variable （0.01pg - 2μg）

Final Volμme （μL）

50 μL

用dd H₂O補足50 μL體系

*如有必要，鎂鹽濃度可進(jìn)一步優(yōu)化。
1．將反應(yīng)溶液在冰上解凍。
2．按下列熱循環(huán)程序進(jìn)行反應(yīng)，以便cDNA合成之后立刻進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
     cDNA合成: 1 cycle: 40–50°C for 10 min
      變性: 1 cycle: 94°C for 2 min
      PCR 擴(kuò)增: 40 cycles:
                     94°C for 15 s
                     55-65°C for 30 s
                     68°C for 1 min/kb
3．用凝膠電泳檢測RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

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一步法RT-PCR反轉(zhuǎn)試劑盒簡介

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提示

產(chǎn) 品	RT0213-00	RT0213-01	RT0213-02	RT0213-03
Reactions	5	20	50	100
Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix	5 μL	20 μL	50 μL	100 μL
2× Reaction mix （optimized bμffer contains dNTP and Mg²⁺）	125 μL	500 μL	1.25 mL	2×1.25 mL
5 mM Magnesiμm Sμlfate	125 μL	500 μL	1.0 mL	2×1.0 mL
dd H₂O	150 μL	600 μL	1.5 mL	2×1.5 mL

組分	50 μl 體系	終濃度
2× Reaction mix	25 μL	1×
Enzyme mix	1.0 μL
Forward Primer （10 μM）	1.0 μL	200 nM
Reverse Primer （10 μM）	1.0 μL	200 nM
RNA template	× μL	Variable （0.01pg - 2μg）
Final Volμme （μL）	50 μL	用dd H₂O補足50 μL體系