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轉(zhuǎn)染各種真核細(xì)胞實(shí)圖及資料

時(shí)間：2013/1/6閱讀：4534
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備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗(yàn)

產(chǎn)品名稱 :
 High Efficiency Transfection Reagent
轉(zhuǎn)染各種真核細(xì)胞
品牌 :
 BIOMIGA
貨號 :
 GT1211-01
規(guī)格 :
 0.5mL/1ml/1.5ml/6ml
詳細(xì)信息 :
 

說明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培養(yǎng)皿的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

產(chǎn)品說明

GeneTran是一種新型的脂質(zhì)體和多聚物混合的轉(zhuǎn)染試劑，可用于各種真核細(xì)胞系的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細(xì)胞和纖維原細(xì)胞、間質(zhì)干細(xì)胞、NCCIT、果蠅細(xì)胞。同時(shí)原代細(xì)胞也能轉(zhuǎn)染，如人腫瘤細(xì)胞、大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞、大鼠和小鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞等。對于懸浮細(xì)胞也有較高的轉(zhuǎn)染效率和較低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞（sf9, sf21, High-Five）。有無血清存在（0-20％）對轉(zhuǎn)染試劑的效果無影響。

主要特點(diǎn)
 
  • 轉(zhuǎn)染各種貼壁細(xì)胞。
  • 對胚胎干細(xì)胞和原代細(xì)胞有較高的轉(zhuǎn)染效率。
  • 對懸浮細(xì)胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細(xì)胞也有很高的轉(zhuǎn)染效率。在同類產(chǎn)品中具有更高的轉(zhuǎn)染效率和更低的毒性。有無血清存在（0-20％）對轉(zhuǎn)染試劑的效果無影響。
  • 可用于單個質(zhì)?；蚨鄠€質(zhì)粒共轉(zhuǎn)。
  • 轉(zhuǎn)染24-72小時(shí)后，有高的蛋白表達(dá)量。
  • 性價(jià)比高
  • 操作簡便
 
保存條件
 
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存12個月。使用之前請先將試劑瞬時(shí)離心。
 
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟
 
以下步驟是用于35mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞的。若用于其他規(guī)格培養(yǎng)皿的轉(zhuǎn)染，請參考表1的用量。所有的數(shù)據(jù)和體積都是每孔的用量。對于絕大多數(shù)的細(xì)胞系和原代細(xì)胞，質(zhì)粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞可只按1:1混合。有時(shí)優(yōu)化條件也是必須的（參見質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化，第5頁）。

A. 轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）
轉(zhuǎn)染前一天鋪板使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞達(dá)到60-70%的匯合度。
1. 對于每一個轉(zhuǎn)染樣本，按如下比例配制轉(zhuǎn)染混合液：
2.5 μg    質(zhì)粒DNA
5 μL       GeneTran
x μL       無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）
              總體積100 μL
* 不能在轉(zhuǎn)染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min。
3. 將混合液加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱。
注：血清濃度對于轉(zhuǎn)染效果無影響，經(jīng)測試高達(dá)20%的胎牛血清濃度也不會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生影響。
4. 在轉(zhuǎn)染后的18-48小時(shí)之間，對細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)之后可 檢測基因表達(dá)。如果檢測到蛋白表達(dá)，請?jiān)谵D(zhuǎn)染后4-5天收集培養(yǎng)液。
5. 如果要得到穩(wěn)定細(xì)胞株，請?jiān)谵D(zhuǎn)染24小時(shí)后按1:10傳代培養(yǎng)。
 
B. 轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞（35 mm培養(yǎng)皿或6孔培養(yǎng)板）
轉(zhuǎn)染時(shí)保證細(xì)胞超過90%的密度
1. 對于每一個轉(zhuǎn)染樣本，按如下比例配制轉(zhuǎn)染混合液：
2.5 μg    質(zhì)粒DNA
5 μL       GeneTran
X μL       無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）
              總體積100 μL
*  不能在轉(zhuǎn)染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40分鐘。
3. 將混合液加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，晃動培養(yǎng)皿混勻培養(yǎng)液。放入CO2培養(yǎng)箱。
    注：血清濃度對于轉(zhuǎn)染效果無影響，經(jīng)測試高達(dá)20%的胎牛血清濃度也不會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生影響。
4. 在轉(zhuǎn)染后的18-48小時(shí)之間，對細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)之后可檢測基因表達(dá)。如果有蛋白表達(dá)，請?jiān)谵D(zhuǎn)染后4-5天收集培養(yǎng)液。
5. 如果要得到穩(wěn)定細(xì)胞株，請?jiān)谵D(zhuǎn)染24小時(shí)后按1：10傳代培養(yǎng)。
表1各種細(xì)胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染推薦用量
 
培養(yǎng)皿/板
表面積（cm2）
培養(yǎng)液（mL）
混合液（μL）
質(zhì)粒（μg）
GeneTran
10cm
56
10
500
10
20-30 µL
60mm
21
3
150
3
6-9 µL
35mm
8
2
100
2.5
5-7.5 µL
6孔
9.5
2
100
2.5
5-7.5 µL
12孔
3.8
1
50
1
2-3 µL
24孔
1.9
0.5
25
0.5
1-1.5 µL
48孔
0.95
0.25
12.5
0.25
0.5-0.75 µL
96孔
0.32
0.1
5
0.1
0.2-0.3 µL

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化
前面介紹的轉(zhuǎn)染步驟是針對一般比較好轉(zhuǎn)的細(xì)胞。
對于C2C12肌肉細(xì)胞系，F(xiàn)uGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉(zhuǎn)染效率不到10%，而GeneTran按照下面的體系轉(zhuǎn)染效率可達(dá)70%：
6 μg            質(zhì)粒DNA
12-18 μL     GeneTran
X μL            無血清DMEM（或其他無血清培養(yǎng)基, PBS, DPBS等）
                   總體積100 μL
 
對于其他細(xì)胞系，可參考以下方法優(yōu)化條件：
A． 在35mm培養(yǎng)板中將質(zhì)粒量增加到3μg，4μg和6μg。
B． 在35mm培養(yǎng)板中將GeneTran增加到15μL。
C． 如果轉(zhuǎn)染效率較高，但死細(xì)胞較多，可降低質(zhì)粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時(shí)間到5-24小時(shí)。
D． 可按下表優(yōu)化條件：
問題
DNA
GeneTran
細(xì)胞毒性
降到1-2 μg
降到2-3 μL
轉(zhuǎn)染效率低
對于難轉(zhuǎn)的細(xì)胞增加到4μg
增加到>1:4
對于特別難轉(zhuǎn)的細(xì)胞增加到6μg
增加到>1:4

 

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