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背景簡(jiǎn)介：

ELISA實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于抗體檢測(cè)，這些實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有考慮樣本中蛋白與酶標(biāo)板表面結(jié)合引起的假陽(yáng)性。在這些非特性反應(yīng)中，檢測(cè)抗體的空白值被所有客戶(hù)考慮到，但是樣本本身的空白值常被客戶(hù)忽略。背景反應(yīng)完全依賴(lài)于樣本本身。如果不考慮樣本的背景反應(yīng)，背景反應(yīng)值也會(huì)計(jì)入讀數(shù)，出現(xiàn)很多不確定的結(jié)果。因此必須考慮到ELISA實(shí)驗(yàn)中各種假陽(yáng)性以得到真實(shí)的數(shù)據(jù)。

圖1釋?zhuān)?/span>對(duì)于抗原包被的試劑盒，低稀釋比的血清，其背景值會(huì)很高，會(huì)超出抗原-抗體反應(yīng)。通過(guò)設(shè)置無(wú)抗原包被孔 （None），很容易測(cè)定背景效應(yīng)。

注：降低試劑盒靈敏度并不能降低低背景反應(yīng)。

Chondrex公司研制的ELISA封閉液（ChonBlock™），能夠有效阻止抗體檢測(cè)試劑盒中的非特異性反應(yīng)，不影響試劑盒本身的抗原抗體反應(yīng)。該封閉液被廣泛用于抗體檢測(cè)試劑盒，例如：人或動(dòng)物血清致病因子，疫苗及自身免疫疾病研究檢測(cè)等。

圖2釋?zhuān)宏P(guān)節(jié)炎病人血清樣本（1/10~1/640）用不同的封閉液稀釋稀釋?zhuān)尤霗z測(cè)板，用抗人IgG-HRP標(biāo)記抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，結(jié)果顯示ChonBlock™能夠有效封閉背景效應(yīng)，而其他緩沖液系統(tǒng)都達(dá)不到以上效果。

圖3釋?zhuān)?3例正常人血清樣本和13例關(guān)節(jié)炎血清樣本1/500用以下稀釋液稀釋稀釋。a)RIA-10% NGS  b）ChonBlock™封閉液，加入到Glycine對(duì)照多肽，CCP（cyclic citrullinated peptide）孔。CCP孔真實(shí)的OD值檢測(cè)值：減去背景OD值（Glycine對(duì)照孔）。

注：RIA-10% NGS緩沖液系統(tǒng)，由于背景效應(yīng)太高，測(cè)不到抗CCP抗體。

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參考文獻(xiàn)

1. Terato et al. Preventing intense false positive and negative reactions attributed to the principle of ELISA to reinvestigate antibody studies in autoimmune diseases. J. Immunol. Methods 407, 15-25 (2014).